M基因編碼的M蛋白在動(dòng)物A的肝細(xì)胞中特異性表達(dá)?，F(xiàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，將外源DNA片段F插入M基因的特定位置，再通過核移植、胚胎培養(yǎng)和胚胎移植等技術(shù)獲得M基因失活的轉(zhuǎn)基因克隆動(dòng)物A，流程如圖所示?；卮鹣铝袉栴}：
（1）在構(gòu)建含有片段F的重組質(zhì)粒過程中，切割質(zhì)粒DNA的工具酶是

限制酶

限制酶

；常用

顯微注射

顯微注射

方法將重組質(zhì)粒導(dǎo)入成纖維細(xì)胞。
（2）在無菌、無毒等適宜環(huán)境中進(jìn)行動(dòng)物A成纖維細(xì)胞的原代和傳代培養(yǎng)時(shí)，需要定期更換培養(yǎng)液，目的是

清除代謝廢物，防止細(xì)胞代謝物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害

清除代謝廢物，防止細(xì)胞代謝物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害

，在培養(yǎng)過程中細(xì)胞往往會(huì)貼壁生長(zhǎng)這種現(xiàn)象稱為

細(xì)胞貼壁

細(xì)胞貼壁

。
（3）胚胎移植時(shí)的早期胚胎一般選

桑葚胚（桑椹胚）或囊胚

桑葚胚（桑椹胚）或囊胚

期的胚胎；移植后一般不會(huì)發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，原因是

受體對(duì)移入子宮的外來胚胎不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)

受體對(duì)移入子宮的外來胚胎不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)

。
（4）以免疫小鼠的B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合，誘導(dǎo)融合的方法是

聚乙二醇或滅活的病毒誘導(dǎo)融合

聚乙二醇或滅活的病毒誘導(dǎo)融合

（答出一點(diǎn)即可）。篩選融合雜種細(xì)胞，制備M蛋白的單克隆抗體。簡(jiǎn)要寫出利用此抗體確定克隆動(dòng)物A中M基因是否失活的實(shí)驗(yàn)思路

取動(dòng)物A和克隆動(dòng)物A的肝組織細(xì)胞，分別提取蛋白質(zhì)進(jìn)行抗原-抗體雜交

取動(dòng)物A和克隆動(dòng)物A的肝組織細(xì)胞，分別提取蛋白質(zhì)進(jìn)行抗原-抗體雜交

。