普通番茄細(xì)胞中含有多聚半乳糖醛酸酶基因,控制細(xì)胞產(chǎn)生多聚半乳糖醛酸酶,該酶能破壞細(xì)胞壁,使番茄軟化,不耐貯藏??茖W(xué)家將抗多聚半乳糖醛酸酶基因?qū)敕鸭?xì)胞,培育出了抗軟化、保鮮時(shí)間長(zhǎng)的轉(zhuǎn)基因番茄。目的基因和質(zhì)粒(含卡那霉素抗性基因KmR)上有 PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ四種限制酶切割位點(diǎn),操作流程如下圖所示。請(qǐng)分析回答下列問(wèn)題:
(1)本實(shí)驗(yàn)的目的基因指的是抗多聚半乳糖醛酸酶基因抗多聚半乳糖醛酸酶基因,在構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí),為了確保目的基因和質(zhì)粒定向連接,應(yīng)該選用的限制酶是SmaⅠ和PstⅠSmaⅠ和PstⅠ。若用 PstⅠ和AluⅠ切割重組質(zhì)粒,則完全酶切后將會(huì)出現(xiàn)33個(gè)序列不同的DNA片段。
(2)要利用培養(yǎng)基篩選已導(dǎo)入目的基因的番茄細(xì)胞,培養(yǎng)基中應(yīng)加入卡那霉素卡那霉素。圖中步驟①→②所示技術(shù)的生物學(xué)原理是細(xì)胞的全能性細(xì)胞的全能性。
(3)據(jù)圖中轉(zhuǎn)基因番茄細(xì)胞中的信息傳遞過(guò)程可知,由于mRNA1和mRNA2相結(jié)合mRNA1和mRNA2相結(jié)合而直接阻礙了多聚半乳糖醛酸酶基因表達(dá)時(shí)的翻譯翻譯過(guò)程,最終使番茄獲得抗軟化的性狀。
(4)如果利用上述方法培育出的番茄不具抗軟化性狀,經(jīng)分子雜交技術(shù)檢測(cè),發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)有目的基因存在,但檢測(cè)不到mRNA1分子,可能原因是目的基因上游缺少啟動(dòng)子啟動(dòng)子。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合.
【答案】抗多聚半乳糖醛酸酶基因;SmaⅠ和PstⅠ;3;卡那霉素;細(xì)胞的全能性;mRNA1和mRNA2相結(jié)合;翻譯;啟動(dòng)子
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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