磷酸吡哆醛（PLP）是維生素B6的活性形式，是多種酶的重要輔酶?？蒲腥藛T從大腸桿菌（E?coliK12）中找到了合成PLP的關(guān)鍵酶A，通過基因工程構(gòu)建了高產(chǎn)PLP的工程菌，流程如圖所示，IPTG可誘導(dǎo)lacI啟動酶A基因表達?；卮鹣铝袉栴}：
（1）在基因工程中，①過程得到的酶A基因稱為 目的基因目的基因。PCR技術(shù)擴增酶A基因過程中，變性的目的是 使酶A基因DNA雙鏈解為單鏈使酶A基因DNA雙鏈解為單鏈。
（2）在構(gòu)建pETDuet-1-A表達載體過程中，酶A基因與質(zhì)粒在DNA連接酶的作用下通過 磷酸二酯磷酸二酯鍵連接起來。③過程常用Ca2+處理，并在一定溫度下促進E?coliBL21吸收表達載體從而完成 轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化過程。
（3）③過程后將工程菌先置于含 氨芐青霉素氨芐青霉素的培養(yǎng)基中篩選出能夠生長的菌落，再做進一步篩選即可得到所需菌落。為驗證④過程得到的是否為高產(chǎn)PLP工程菌，某同學進行了相關(guān)實驗。請簡要寫出實驗思路：將原始E?coliBL21菌株與重組菌株分別在含有適量IPTG的培養(yǎng)液中適宜條件下培養(yǎng)，一段時間后分別檢測培養(yǎng)液中PLP的含量將原始E?coliBL21菌株與重組菌株分別在含有適量IPTG的培養(yǎng)液中適宜條件下培養(yǎng)，一段時間后分別檢測培養(yǎng)液中PLP的含量。
（4）研究表明，當IPTG濃度過高時，PLP產(chǎn)量反而下降，其原因可能是 IPTG濃度過高會抑制工程菌的生長IPTG濃度過高會抑制工程菌的生長。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】目的基因；使酶A基因DNA雙鏈解為單鏈；磷酸二酯；轉(zhuǎn)化；氨芐青霉素；將原始E?coliBL21菌株與重組菌株分別在含有適量IPTG的培養(yǎng)液中適宜條件下培養(yǎng)，一段時間后分別檢測培養(yǎng)液中PLP的含量；IPTG濃度過高會抑制工程菌的生長
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：1引用：2難度：0.6
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴增目的基因時，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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