目前基因工程所用的質(zhì)粒載體主要是以天然細(xì)菌質(zhì)粒的各種元件為基礎(chǔ)重新組建的人工質(zhì)粒，pBR322質(zhì)粒是較早構(gòu)建的質(zhì)粒載體，其主要結(jié)構(gòu)如圖一所示．

（1）構(gòu)建人工質(zhì)粒時要有抗性基因，以便于

篩選（鑒別目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞）

篩選（鑒別目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞）

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（2）pBR32Z分子中有單個EcoRI限制酶作用位點，EcoR 1只能識別序列一GAATTC一，并只能在G與A之間切割．若在某目的基因的兩側(cè)各有1個EcoRI的切點，請畫出目的基因兩側(cè)被限制酶EcoRI切割后所形成的黏性末端．

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（3）pBR322分子中另有單個的BamHI限制酶作用位點，現(xiàn)將經(jīng)BamHI處理后的質(zhì)粒與用另一種限制酶BgIⅡ處理得到的目的基因，通過DNA連接酶作用恢復(fù)鍵，成功的獲得了重組質(zhì)粒．說明

限制酶BamHⅠ和限制酶BglⅡ的酶切產(chǎn)物具有相同末端

限制酶BamHⅠ和限制酶BglⅡ的酶切產(chǎn)物具有相同末端

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（4）為了檢測上述重組質(zhì)粒是否導(dǎo)入原本無amp^R和tet^R的大腸桿菌，將大腸桿菌在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖二的菌落．再將滅菌絨布按到培養(yǎng)基上，使絨布面沾上菌落，然后將絨布按到含四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖三的結(jié)果（空圈表示與圖二對照無菌落的位置）．與圖三空圈相對應(yīng)的圖二中的菌落表現(xiàn)型是

能抗氨芐青霉素，但不能抗四環(huán)素

能抗氨芐青霉素，但不能抗四環(huán)素

，圖三結(jié)果顯示，多數(shù)大腸桿菌導(dǎo)入的是

既能抗氨芐青霉素，又能抗四環(huán)素的pBR322質(zhì)粒

既能抗氨芐青霉素，又能抗四環(huán)素的pBR322質(zhì)粒

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