甜蛋白是一種高甜度的特殊蛋白質(zhì)。為了改善黃瓜的口感，研究人員利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將一種甜蛋白基因成功導(dǎo)入黃瓜細(xì)胞，得到了轉(zhuǎn)基因植株。如圖1、圖2分別為甜蛋白基因編碼鏈（僅示部分堿基）和Ti質(zhì)粒的示意圖，其中①～⑤表示不同位點(diǎn)?；卮鹣铝袉栴}：

（1）獲取甜蛋白基因時(shí)，通常是在細(xì)胞內(nèi)提取mRNA，一般先通過

逆轉(zhuǎn)錄

逆轉(zhuǎn)錄

得到DNA，再經(jīng)

PCR技術(shù)

PCR技術(shù)

獲取大量甜蛋白基因，酶切后再連接到Ti質(zhì)粒上。如表為不同限制酶的作用位點(diǎn)，在構(gòu)建甜蛋白基因表達(dá)載體時(shí)，應(yīng)選用的限制酶是

XhoⅠ和XbaⅠ

XhoⅠ和XbaⅠ

。

限制酶	BamHⅠ	PstⅠ	XhoⅠ	XbaⅠ
識(shí)別序列和切割位點(diǎn)	5'G↓GATCC3'	5'C↓TGCAG3'	5'C↓TCGAG3'	5'T↓CTAGA3'

（2）研究人員利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將一種甜蛋白基因成功導(dǎo)入黃瓜細(xì)胞，依據(jù)農(nóng)桿菌的侵染特點(diǎn)，甜蛋白基因應(yīng)插入到Ti質(zhì)粒的

T-DNA

T-DNA

上，經(jīng)過轉(zhuǎn)化作用，進(jìn)入黃瓜細(xì)胞，并將其插入到

黃瓜細(xì)胞染色體的DNA上

黃瓜細(xì)胞染色體的DNA上

，從而使其穩(wěn)定表達(dá)。對(duì)載體Ti質(zhì)粒進(jìn)行改造時(shí)，需要插入多個(gè)限制酶單一切點(diǎn)，應(yīng)選擇在圖2中的位點(diǎn)

③

③

（填序號(hào)）處插入。
（3）轉(zhuǎn)入甜蛋白基因后的黃瓜細(xì)胞，轉(zhuǎn)化后應(yīng)在培養(yǎng)基中添加

潮霉素

潮霉素

（填“潮霉素”或“卡那霉素”），篩選轉(zhuǎn)化成功的愈傷組織。若要獲得產(chǎn)甜蛋白能力更強(qiáng)的基因，可以對(duì)甜蛋白基因進(jìn)行改造，最終得到更多的甜蛋白，該過程可以通過蛋白質(zhì)工程完成，基本思路為

預(yù)期甜蛋白的功能→設(shè)計(jì)甜蛋白的結(jié)構(gòu)→推測(cè)應(yīng)有的氨基酸序列→找到對(duì)應(yīng)的基因序列

預(yù)期甜蛋白的功能→設(shè)計(jì)甜蛋白的結(jié)構(gòu)→推測(cè)應(yīng)有的氨基酸序列→找到對(duì)應(yīng)的基因序列

（用文字和箭頭表示）。