U-mir是家蠶體內(nèi)的一種小分子非編碼RNA，可與某些RNA尾端的一段非編碼序列（3'-UTR）結(jié)合，進(jìn)而影響基因的表達(dá)。為探究U-mir是否影響家蠶基因B（調(diào)控家蠶眼睛發(fā)育）的表達(dá)，科研人員將基因B中對應(yīng)3'-UTR的DNA片段與熒光素酶基因（U-mir不影響熒光素酶基因的表達(dá)）重組后導(dǎo)入家蠶胚胎細(xì)胞觀察其表達(dá)結(jié)果。請回答下列問題：

（1）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增基因B對應(yīng)3'-UTR的DNA片段，應(yīng)先依據(jù)該基因的一段核苷酸序列合成

引物

引物

。
（2）利用

限制酶（或限制性內(nèi)切核酸酶）和DNA連接酶

限制酶（或限制性內(nèi)切核酸酶）和DNA連接酶

（填酶的種類）可將上述DNA片段插入熒光素酶基因表達(dá)載體（如圖1）上的

2

2

位點，構(gòu)建重組載體。
（3）將重組載體與U-mir共同導(dǎo)入家蠶胚胎細(xì)胞，同時應(yīng)設(shè)置兩個對照組，即將

熒光素酶基因表達(dá)載體

熒光素酶基因表達(dá)載體

、

重組載體

重組載體

分別導(dǎo)入兩組家蠶胚胎細(xì)胞。
（4）科研人員分別從實驗組和對照組細(xì)胞中提取蛋白質(zhì)，經(jīng)處理檢測后獲得相對熒光值（在適宜條件下，熒光素酶可催化熒光素發(fā)生氧化反應(yīng)并發(fā)出熒光），其結(jié)果如圖2。
依據(jù)實驗結(jié)果可推斷：

U-mir影響基因B的表達(dá)

U-mir影響基因B的表達(dá)

。分析可能原因：

U-mir與基因B所轉(zhuǎn)錄的mRNA的3'-UTR（根據(jù)堿基互補(bǔ)配對原則）結(jié)合，進(jìn)而抑制基因B的表達(dá)（翻譯過程）

U-mir與基因B所轉(zhuǎn)錄的mRNA的3'-UTR（根據(jù)堿基互補(bǔ)配對原則）結(jié)合，進(jìn)而抑制基因B的表達(dá)（翻譯過程）

。