2009年10月，我國(guó)自主研發(fā)的轉(zhuǎn)基因抗蟲水稻“華恢1號(hào)”獲得農(nóng)業(yè)部頒發(fā)的安全證書．圖甲表示該抗蟲水稻主要培育流程，據(jù)圖回答：

（1）④過(guò)程應(yīng)用的主要生物技術(shù)是

植物組織培養(yǎng)

植物組織培養(yǎng)

．
（2）殺蟲基因（crylA）是人們根據(jù)幾種Bt毒蛋白的分子結(jié)構(gòu)，設(shè)計(jì)并人工合成的，這屬于

蛋白質(zhì)

蛋白質(zhì)

工程技術(shù)范疇．
（3）組建理想的載體需要對(duì)天然的質(zhì)粒進(jìn)行改造．下圖是天然土壤農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒結(jié)構(gòu)示意圖（示部分基因及部分限制性內(nèi)切酶作用位點(diǎn)），據(jù)圖乙分析：
①人工改造時(shí)，要使抗蟲基因表達(dá)，還應(yīng)插入

啟動(dòng)子

啟動(dòng)子

．
②人工改造時(shí)用限制酶Ⅱ處理，其目的是：第一，去除質(zhì)粒上的

tms和tmr

tms和tmr

（基因），保證T-DNA進(jìn)入水稻細(xì)胞后不會(huì)引起細(xì)胞的無(wú)限分裂和生長(zhǎng)；第二，使質(zhì)粒帶有單一限制酶作用位點(diǎn)，有利于

目的基因（或外源DNA）準(zhǔn)確插入

目的基因（或外源DNA）準(zhǔn)確插入

．第三，使質(zhì)粒大小合適，可以提高轉(zhuǎn)化效率等．
③若用限制酶Ⅰ分別切割改造過(guò)的理想質(zhì)粒和帶有抗蟲基因的DNA分子，并構(gòu)成重組Ti質(zhì)粒．分別以含四環(huán)素和卡那霉素的培養(yǎng)基培養(yǎng)已成功導(dǎo)入抗蟲基因的水稻胚細(xì)胞，觀察到的細(xì)胞生長(zhǎng)的現(xiàn)象是

在含卡那霉素的培養(yǎng)基能夠生長(zhǎng)，而在含四環(huán)素的培養(yǎng)基中不能生長(zhǎng)

在含卡那霉素的培養(yǎng)基能夠生長(zhǎng)，而在含四環(huán)素的培養(yǎng)基中不能生長(zhǎng)

．科學(xué)家預(yù)言，此種“轉(zhuǎn)基因抗蟲水稻”獨(dú)立種植若干代以后，將出現(xiàn)不抗蟲的植株，此現(xiàn)象來(lái)源于

基因突變

基因突變

．
（4）由于重組質(zhì)粒成功導(dǎo)入受體細(xì)胞的頻率

低

低

．所以在轉(zhuǎn)化后通常需要進(jìn)行

篩選

篩選

操作．
（5）為擴(kuò)大可耕地面積，增加糧食產(chǎn)量，科學(xué)家應(yīng)用耐鹽基因繼續(xù)改良上述抗蟲水稻．
①獲得耐鹽基因后，構(gòu)建重組DNA分子所用的限制性核酸內(nèi)切酶作用于圖丙中的

a

a

處，DNA連接酶作用于

a

a

處．（填“a”或“b”）
②將重組DNA分子導(dǎo)入水稻受體細(xì)胞的常用方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、

基因槍

基因槍

法和

花粉管通道

花粉管通道

法．
③為了確定耐鹽轉(zhuǎn)基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素標(biāo)記的

耐鹽基因（目的基因）

耐鹽基因（目的基因）

作探針進(jìn)行分子雜交檢測(cè)，又要用

一定濃度鹽水澆灌（移栽到鹽堿地中）

一定濃度鹽水澆灌（移栽到鹽堿地中）

方法從個(gè)體水平鑒定水稻植株的耐鹽性．