T-DNA插人失活技術(shù)是目前使用最為廣泛的植物基因敲除手段，該技術(shù)利用農(nóng)桿菌T-DNA介導(dǎo)轉(zhuǎn)化，將一段帶有報(bào)告基因的DNA序列整合到植物基因組DNA上，如果這段DNA插入到靶基因（待敲除基因）內(nèi)部，就會(huì)使靶基因失活。回答下列問(wèn)題。
（1）使用T-DNA介導(dǎo)轉(zhuǎn)化的原因是 T-DNA能轉(zhuǎn)移到被侵染的細(xì)胞，并且將其整合到該細(xì)胞的染色體DNA上T-DNA能轉(zhuǎn)移到被侵染的細(xì)胞，并且將其整合到該細(xì)胞的染色體DNA上。報(bào)告基因的作用是 檢測(cè)DNA序列是否插入到靶基因中檢測(cè)DNA序列是否插入到靶基因中。
（2）T-DNA在植物基因組中會(huì)發(fā)生隨機(jī)整合，可利用PCR技術(shù)進(jìn)行鑒定。某二倍體純合植物A的某靶基因長(zhǎng)度為900bp,利用T-DNA插入失活技術(shù)處理A植株獲得該配基因的兩種突變體B、C?，F(xiàn)將依據(jù)靶基因的兩端序列分別設(shè)計(jì)的引物1和引物2以及依據(jù)插入片段某端設(shè)計(jì)的引物3均加入PCR反應(yīng)體系，對(duì)A、B、C三種植株的靶基因進(jìn)行擴(kuò)增，電泳結(jié)果如圖所示。
①引物的作用是 使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開(kāi)始連接脫氧核苷酸使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開(kāi)始連接脫氧核苷酸；依據(jù)靶基因序列設(shè)計(jì)的兩種引物之間不能堿基互補(bǔ)配對(duì)，原因是 防止引物之間結(jié)合形成雙鏈，降低引物與DNA模板鏈結(jié)合的效率防止引物之間結(jié)合形成雙鏈，降低引物與DNA模板鏈結(jié)合的效率。
②根據(jù)電泳結(jié)果分析，突變株B、C中DNA序列插入的位置 相同相同（填“相同“或“不同“）；突變株C出現(xiàn)該結(jié)果的原因是 靶基因均被敲除掉靶基因均被敲除掉。
【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定．
【答案】T-DNA能轉(zhuǎn)移到被侵染的細(xì)胞，并且將其整合到該細(xì)胞的染色體DNA上；檢測(cè)DNA序列是否插入到靶基因中；使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開(kāi)始連接脫氧核苷酸；防止引物之間結(jié)合形成雙鏈，降低引物與DNA模板鏈結(jié)合的效率；相同；靶基因均被敲除掉
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：7引用：1難度：0.6
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1．數(shù)字PCR技術(shù)是一種核酸分子絕對(duì)定量技術(shù)，其原理如圖所示。下列有關(guān)敘述正確的是（ ?。?img alt="菁優(yōu)網(wǎng)" src="https://img.jyeoo.net/quiz/images/202204/49/6d911ea3.png" style="vertical-align:middle" />
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：6引用：2難度：0.6 -
2．PCR技術(shù)不僅可以擴(kuò)增目的基因，還可用于定點(diǎn)誘變目的基因等。大引物PCR就是一種定點(diǎn)突變技術(shù)。大引物PCR需要用到引物進(jìn)行兩次PCR，其操作步驟為：
①根據(jù)目的基因序列設(shè)計(jì)引物，得到兩個(gè)常規(guī)引物，分別為常規(guī)上游引物和常規(guī)下游引物；
②根據(jù)突變堿基所處序列位置設(shè)計(jì)突變上游引物，突變位點(diǎn)位于突變引物序列的中間位置
③由突變上游引物與常規(guī)下游引物進(jìn)行第一次PCR反應(yīng)得到下游大引物；
④用得到的下游大引物中和另一個(gè)常規(guī)上游引物進(jìn)行第二次PCR擴(kuò)增，得到突變目的基因序列。回答下列問(wèn)題：
（1）PCR擴(kuò)增的第一步是使雙鏈模板DNA變性。DNA中G+C的含量與變性要求的溫度有關(guān)，DNA中G+C的含量越多，要求的變性溫度越高。其原因是。該P(yáng)CR擴(kuò)增技術(shù)所需的基本條件是種引物、原料、模板、。
（2）在第一次PCR反應(yīng)中，形成圖示雙鏈DNA至少要經(jīng)過(guò)次復(fù)制。第一次PCR的產(chǎn)物DNA的條鏈作為第二次PCR所用的引物。與X射線誘變相比，該突變技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)是。
（3）如果要利用微生物進(jìn)一步克隆PCR定點(diǎn)誘變產(chǎn)物，其步驟包括：、、微生物的篩選和培養(yǎng)、從菌群中獲取更多目的基因。將獲取目的基因和質(zhì)粒進(jìn)行連接后，需先用處理農(nóng)桿菌以便將基因表達(dá)載體導(dǎo)入馬鈴薯細(xì)胞，將馬鈴薯細(xì)胞培養(yǎng)成幼苗時(shí)經(jīng)過(guò)的兩個(gè)過(guò)程是。檢測(cè)目的基因是否在馬鈴薯細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄出了mRNA，所采用的方法是。發(fā)布：2024/12/30 23:0:2組卷：32引用：3難度：0.6 -
3．下列關(guān)于DNA片段擴(kuò)增及其鑒定的說(shuō)法錯(cuò)誤的是（ ）
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：3引用：3難度：0.7
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