1965年中國科學家人工合成了具有生物活性的結晶牛胰島素，摘取了人工合成蛋白質的桂冠。此后科學家又提出了利用基因工程改造大腸桿菌生產人胰島素的兩種方法：“AB”法是根據胰島素A、B兩條肽鏈的氨基酸序列人工合成兩種DNA片段，利用工程菌分別合成兩條肽鏈后將其混合自然形成胰島素；“BCA”法是利用胰島B細胞中的mRNA得到胰島素基因，利用工程菌獲得胰島素。這兩種方法使用同一種質粒作為載體。請回答下列問題。
（1）如圖1是利用基因工程生產人胰島素過程中使用的質粒及目的基因的部分結構。在設計PCR引物時最好添加限制酶 EcoRⅠ和XhoⅠEcoRⅠ和XhoⅠ的識別序列，選擇依據是 胰島素基因中有SalⅠ和NheⅠ的識別序列，選用這兩種會破壞目的基因；LacZ基因和氨芐青霉素抗性基因中均有MunI的識別序列，會導致無法篩選；選EcoRⅠ和XhoⅠ能避免目的基因、質粒的自身環(huán)化和反向連接，使目的基因和質粒正確連接胰島素基因中有SalⅠ和NheⅠ的識別序列，選用這兩種會破壞目的基因；LacZ基因和氨芐青霉素抗性基因中均有MunI的識別序列，會導致無法篩選；選EcoRⅠ和XhoⅠ能避免目的基因、質粒的自身環(huán)化和反向連接，使目的基因和質粒正確連接。
（2）目前，科學家已通過將B鏈的第28位氨基酸—脯氨酸（密碼子為CCU）替換為天冬氨酸（密碼子為GAU），有效抑制了胰島素的聚合，研發(fā)出速效胰島素類似物產品。在改造用BCA法獲得的胰島素基因時，可運用大引物PCR進行定點突變，相關原理如圖2所示。
為保證有效抑制胰島素的聚合，進行第一次PCR時所用的突變上游引物的合理設計是 將CCT改為GAT將CCT改為GAT。利用所獲得的大引物、模板和其他引物等進行第二次PCR，要獲得帶有突變位點的、適于與上圖中質粒構建基因表達載體的改良基因，引物應選用大引物兩條鏈中的 ②②（填“①”或“②”）；至少進行 33次循環(huán)才能獲得雙鏈等長的改良基因。
（3）β-半乳糖苷酶可以分解無色的X-gal產生藍色物質使菌落呈現(xiàn)藍色，否則菌落為白色。將轉化后的大腸桿菌接種到添加了 氨芐青霉素、X-gal氨芐青霉素、X-gal等成分的培養(yǎng)基上，呈現(xiàn) 白白色的菌落即為含有重組質粒的大腸桿菌菌落。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】EcoRⅠ和XhoⅠ；胰島素基因中有SalⅠ和NheⅠ的識別序列，選用這兩種會破壞目的基因；LacZ基因和氨芐青霉素抗性基因中均有MunI的識別序列，會導致無法篩選；選EcoRⅠ和XhoⅠ能避免目的基因、質粒的自身環(huán)化和反向連接，使目的基因和質粒正確連接；將CCT改為GAT；②；3；氨芐青霉素、X-gal；白
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/8/24 9:0:8組卷：15引用：1難度：0.5
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1．下列有關基因工程技術和蛋白質工程技術敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
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3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2難度：0.6