有研究表明,肥胖者的脂肪細胞中某基因(miR)的表達異常活躍。旨在研究miR的表達對人脂肪細胞的影響,根據(jù)以下實驗材料完成實驗思路,并預(yù)測實驗結(jié)果及分析。
實驗材料:培養(yǎng)瓶若干,細胞培養(yǎng)液,脂肪前體細胞懸液、成熟脂肪細胞懸液,抑制劑P(抑制miR的表達),TUNEL檢測試劑盒(檢測細胞凋亡情況),流式細胞測定儀(檢測細胞周期分布),血細胞計數(shù)板,顯微鏡等。
(要求和說明:不考慮加入抑制劑P后體積變化等誤差。細胞只進行原代培養(yǎng)且培養(yǎng)條件適宜。成熟脂肪細胞不具分裂能力。各種儀器操作和指標檢測均不作具體要求)
(1)完善實驗思路:
①取培養(yǎng)瓶并各加入等量適量的細胞培養(yǎng)液,分組處理如下,每組設(shè)置若干個重復(fù)樣品。
A組:+脂肪前體細胞懸液; B組:+脂肪前體細胞懸液+抑制劑P;C組:+成熟脂肪細胞懸液B組:+脂肪前體細胞懸液+抑制劑P;C組:+成熟脂肪細胞懸液;D組:+成熟脂肪細胞懸液+抑制劑P。
②各組樣品在相同且適宜的條件下培養(yǎng)一段時間后,用TUNEL檢測試劑盒檢測成熟脂肪細胞凋亡情況,借助顯微鏡用血細胞計數(shù)板檢測脂肪前體細胞的數(shù)目借助顯微鏡用血細胞計數(shù)板檢測脂肪前體細胞的數(shù)目,用流式細胞測定儀脂肪前體細胞的細胞周期分布;
③重復(fù)②若干次;
④對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計并分析。
(2)預(yù)測實驗結(jié)果:圖1為實驗中A、B組某次測定的結(jié)果。請在圖2坐標系中繪制成熟脂肪細胞數(shù)量變化曲線示意圖(N0表示原始數(shù)量)。
(3)分析與討論:
①實驗結(jié)果表明,抑制劑P主要阻滯脂肪前體細胞分裂周期的 G1G1期,從而抑制細胞增殖。另外,抑制劑P還能顯著提高成熟脂肪細胞的凋亡率。
②接種細胞時,脂肪前體細胞接種的原始數(shù)量要比N0少少(填“多”或“少”)一些,其原因是 需檢測脂肪前體細胞增殖,(而成熟脂肪細胞只凋亡)需檢測脂肪前體細胞增殖,(而成熟脂肪細胞只凋亡)。在實驗期間,若每天使用比濁計A組和B組培養(yǎng)瓶中的渾濁度并進行比較分析,其結(jié)果是 A組和B組渾濁度均逐漸增大,且A組大于B組A組和B組渾濁度均逐漸增大,且A組大于B組。
③綜上分析,miR的活躍表達對脂肪細胞起到 促進分裂,減緩(/抑制)調(diào)亡促進分裂,減緩(/抑制)調(diào)亡作用,導(dǎo)致肥胖。
【考點】細胞死亡.
【答案】B組:+脂肪前體細胞懸液+抑制劑P;C組:+成熟脂肪細胞懸液;借助顯微鏡用血細胞計數(shù)板檢測脂肪前體細胞的數(shù)目;G1;少;需檢測脂肪前體細胞增殖,(而成熟脂肪細胞只凋亡);A組和B組渾濁度均逐漸增大,且A組大于B組;促進分裂,減緩(/抑制)調(diào)亡
【解答】
【點評】
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