透明質(zhì)酸酶臨床常用作藥物滲透劑，目前市場上出售的透明質(zhì)酸酶主要從動物組織中提取，成本高且提純困難．科研人員嘗試將透明質(zhì)酸酶基因（Hyl）高效表達(dá)；重疊延伸PCR是一種定點(diǎn)突變技術(shù)，主要設(shè)計(jì)思路是用具有互補(bǔ)配對片段的引物，進(jìn)行PCR1和PCR2獲得部分重疊的兩種 DNA片段，再在隨后的擴(kuò)增反應(yīng)中通過重疊部分的互補(bǔ)和延伸獲得目的基因．其過程如圖所示，Nco I和XhoI為限制酶識別位點(diǎn)．請分析回答下列有關(guān)問題：
（1）步驟②中所用到的工具酶有限制酶和DNA連接酶限制酶和DNA連接酶，NcoⅠ切割磷酸二酯磷酸二酯鍵．
（2）步驟①進(jìn)行定點(diǎn)突變的目的是防止限制酶（NcoI）破壞目的基因防止限制酶（NcoI）破壞目的基因，將透明質(zhì)酸酶基因轉(zhuǎn)入大腸桿菌使其高效表達(dá)，利用了大腸桿菌的繁殖快，單細(xì)胞，遺傳物質(zhì)相對較少繁殖快，單細(xì)胞，遺傳物質(zhì)相對較少特點(diǎn)，導(dǎo)入大腸桿菌時，首先要用Ca2+Ca2+處理．
（3）在利用重疊延伸PCR進(jìn)行定點(diǎn)突變時需要如圖所示四種引物，若PCR1所用引物為引物1和引物3，則PCR2時B 點(diǎn)所選用的引物是圖中的引物4引物4，如果突變后的透明質(zhì)酸酶基因進(jìn)行PCR，所選的引物為引物1和引物2引物1和引物2．
（4）谷丙轉(zhuǎn)氨酶和天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶是長期用于病毒性肝炎患者肝功能的檢測指標(biāo)．最近，研究者提出檢測空腹血清透明質(zhì)酸酶水平了解肝硬化患者的肝損害程度，請分析其機(jī)理．正常情況下，透明質(zhì)酸酶在細(xì)胞中存在，血清透明質(zhì)酸酶高，說明肝細(xì)胞壞死增多正常情況下，透明質(zhì)酸酶在細(xì)胞中存在，血清透明質(zhì)酸酶高，說明肝細(xì)胞壞死增多．
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】限制酶和DNA連接酶；磷酸二酯；防止限制酶（NcoI）破壞目的基因；繁殖快，單細(xì)胞，遺傳物質(zhì)相對較少；Ca2+；引物4；引物1和引物2；正常情況下，透明質(zhì)酸酶在細(xì)胞中存在，血清透明質(zhì)酸酶高，說明肝細(xì)胞壞死增多
【解答】
【點(diǎn)評】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：17引用：2難度：0.3
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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