1965年中國科學家人工合成了具有生物活性的結(jié)晶牛胰島素，摘取了人工合成蛋白質(zhì)的桂冠。此后科學家又提出了利用基因工程改造大腸桿菌生產(chǎn)人胰島素的兩種方法：AB法是根據(jù)胰島素 A、B兩條肽鏈的氨基酸序列人工合成兩種DNA片段，利用工程菌分別合成兩條肽鏈后將其混合自然形成胰島素；BCA 法是利用胰島B細胞中的mRNA 得到胰島素基因，導入工程菌獲得胰島素。這兩種方法使用同一種質(zhì)粒作為載體。回答下列問題。

（1）AB法中人工合成的兩種DNA片段均有多種可能的序列的原因是

密碼子具有簡并性，

密碼子具有簡并性，

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AB和BCA

AB和BCA

（填“AB“、“BCA“或“AB和 BCA“）法獲取的目的基因中不含人胰島素基因啟動子。
（2）圖中是利用基因工程生產(chǎn)人胰島素過程中使用的質(zhì)粒及目的基因的部分結(jié)構(gòu)。為使目的基因與載體正確連接，在設(shè)計PCR引物時可添加限制酶

XhoⅠ和MunⅠ

XhoⅠ和MunⅠ

的識別序列。通過上述方法獲得人的胰島素基因后，需要通過PCR技術(shù)進行擴增，已知胰島素基因左端①處的堿基序列為-CCTTTCAGCTCA-，則其中一種引物設(shè)計的序列是5′-

CTCGAGCCTTTCAGCTCA

CTCGAGCCTTTCAGCTCA

-3′。
（3）β一半乳糖苷酶可以分解無色的X-gal產(chǎn)生藍色物質(zhì)使菌落呈現(xiàn)藍色，否則菌落為白色。據(jù)此簡述篩選工程菌的過程

經(jīng)鈣離子處理的大腸桿菌與重組質(zhì)?；旌吓囵B(yǎng)一段時間后，再將大腸桿菌接種到添加了氨芐青霉素和X-gal的培養(yǎng)基上篩選出白色的菌落即為工程菌

經(jīng)鈣離子處理的大腸桿菌與重組質(zhì)?；旌吓囵B(yǎng)一段時間后，再將大腸桿菌接種到添加了氨芐青霉素和X-gal的培養(yǎng)基上篩選出白色的菌落即為工程菌

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（4）科學家利用蛋白質(zhì)工程技術(shù)，研制出了賴脯胰島素，與天然胰島素相比，其皮下注射后易吸收、起效快。寫出獲取賴脯胰島素基因的流程：

從預期的蛋白質(zhì)功能出發(fā)→設(shè)計預期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測應(yīng)有的氨基酸序列→找到相對于的脫氧核苷酸序列

從預期的蛋白質(zhì)功能出發(fā)→設(shè)計預期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測應(yīng)有的氨基酸序列→找到相對于的脫氧核苷酸序列

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