M基因編碼的M蛋白在動物A的肝細(xì)胞中特異性表達(dá)，現(xiàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，將外源DNA片段F插入M基因的特定位置，再通過核移植、胚胎培養(yǎng)和胚胎移植等技術(shù)獲得M基因失活的轉(zhuǎn)基因克隆動物A，流程如圖所示?；卮鹣铝袉栴}：
（1）在構(gòu)建含有片段F的重組質(zhì)粒過程中，切割質(zhì)粒DNA的工具酶是

限制酶

限制酶

，這類酶能將特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的

磷酸二酯鍵

磷酸二酯鍵

斷開。
（2）在無菌、無毒等適宜環(huán)境中進(jìn)行動物A成纖維細(xì)胞的原代和傳代培養(yǎng)時(shí)，需要定期更換培養(yǎng)液，目的是

清除代謝產(chǎn)物，防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累對細(xì)胞自身造成危害

清除代謝產(chǎn)物，防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累對細(xì)胞自身造成危害

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（3）與胚胎細(xì)胞核移植技術(shù)相比，體細(xì)胞核移植技術(shù)的成功率更低，原因是

動物胚胎細(xì)胞分化程度低，恢復(fù)其全能性相對容易，動物體細(xì)胞分化程度高，恢復(fù)其全能性十分困難

動物胚胎細(xì)胞分化程度低，恢復(fù)其全能性相對容易，動物體細(xì)胞分化程度高，恢復(fù)其全能性十分困難

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（4）鑒定轉(zhuǎn)基因動物：以已免疫小鼠的

B

B

淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞通過

PEG

PEG

（化學(xué)） 融合法誘導(dǎo)細(xì)胞融合，篩選融合雜種細(xì)胞，制備M蛋白的單克隆抗體。