干燥綜合征（SS）是一種自身免疫病，患者血清中存在多種抗體，其中SSB抗體特異性最強(qiáng)?？蒲腥藛T為生產(chǎn)SSB抗體的檢測(cè)試劑，利用基因工程獲得重組SSB蛋白，流程如下，請(qǐng)回答：
（1）利用RNA通過(guò)①過(guò)程獲得cDNA需要 逆轉(zhuǎn)錄逆轉(zhuǎn)錄酶，從而獲得SSB基因，SSB基因通過(guò)PCR擴(kuò)增，其延伸階段需要 耐高溫的DNA聚合耐高溫的DNA聚合酶的參與，而且在緩沖液中添加 Mg2+Mg2+以便激活該酶的活性。目的基因片段擴(kuò)增n代，共需要 2n+1-22n+1-2個(gè)引物。
（2）PCR循環(huán)之前，常要進(jìn)行一次預(yù)變性，預(yù)變性的目的是增加 模板DNA徹底變性模板DNA徹底變性的概率，用PCR方法擴(kuò)增目的基因時(shí) 不必不必（填“必須”或“不必”）知道基因的全部序列。
（3）為與PET41a質(zhì)粒連接，獲得的目的基因A兩端要含有 BamHI和XhoIBamHI和XhoI（寫(xiě)出限制酶名稱(chēng)）酶切位點(diǎn)。DNA連接酶催化目的基因片段與質(zhì)粒載體片段之間形成的化學(xué)鍵是 磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵。
（4）獲得含SSB基因的重組質(zhì)粒后，進(jìn)行如下實(shí)驗(yàn)切割原質(zhì)粒和重組質(zhì)粒，獲得片段大小見(jiàn)表格（1kb=1000堿基對(duì)），分析數(shù)據(jù)，計(jì)算可得SSB基因的長(zhǎng)度為 3Kb3Kb。與人基因組文庫(kù)中的SSB基因相比，通過(guò)①過(guò)程獲得的SSB基因結(jié)構(gòu)特點(diǎn) 無(wú)無(wú)（填“有”或“無(wú)”）啟動(dòng)子、終止子和內(nèi)含子等非編碼序列。
| 限制酶 | EcoRI | BanHI和XhoI |
| 原質(zhì)粒 | 8.1kb | 2.7kb、5.4kb |
| 重組質(zhì)粒 | 3.4kb、5.0kb | 未做該處理 |
Ca2+
Ca2+
處理過(guò)的大腸桿菌內(nèi)，并接種于添加 卡那霉素
卡那霉素
的培養(yǎng)基上，收集菌落進(jìn)行鑒定，將陽(yáng)性菌落進(jìn)一步純化后再將菌體破碎處理，篩選得到重組SSB蛋白。【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合；DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定．
【答案】逆轉(zhuǎn)錄；耐高溫的DNA聚合；Mg2+；2n+1-2；模板DNA徹底變性；不必；BamHI和XhoI；磷酸二酯鍵；3Kb；無(wú)；Ca2+；卡那霉素
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/5/22 8:0:8組卷：6引用：1難度：0.6
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過(guò)基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉?wèn)題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫(kù)中獲得。基因文庫(kù)包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開(kāi)始時(shí)，解開(kāi)DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過(guò)程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來(lái)的酶，常見(jiàn)的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒(méi)有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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