特異性重組的Cre/loxP敲除系統(tǒng)是首先利用同源重組將基因組上的靶基因替換為兩端帶有重組位點(diǎn)loxP的karR基因，然后由重組酶Cre識別loxP位點(diǎn)并發(fā)生重組反應(yīng)，去除基因組上的karR基因，進(jìn)一步利用質(zhì)粒的溫敏特性將其消除，從而實(shí)現(xiàn)靶基因的敲除。如圖是研究人員利用Cre/loxP敲除系統(tǒng)敲除谷氨酸棒狀桿菌argR基因（精氨酸代謝的調(diào)控因子），獲得高產(chǎn)精氨酸菌株的過程，其中kanR是卡那霉素抗性基因，cat是氯霉素抗性基因，HindⅢ、BanHⅠ是限制酶。請據(jù)圖回答下列問題：
（1）①過程的原料是 dNTPdNTP，所需的酶是 Taq酶Taq酶。
（2）下列引物1、引物2用于擴(kuò)增argR基因上游序列，引物3、引物4用于擴(kuò)增argR基因下游序列，下劃線序列是相關(guān)限制酶識別序列，則HindⅢ、BamHⅠ的識別序列分別是 AAGCTTAAGCTT、GGATCCGGATCC。
引物1：5'-GTCGACGGTATCGATAAGCTTAGGACTCAAACTTATGACTTCACAACCA-3'
引物2：5-CGCCCTATAGTGAGTCGTATTGGGATTTAAGTTTTCCGGTGTTGACG-3'
引物3：5'-CTTTAGTGAGGGTTAATTGCGCGTTAATCGCTTGTTAATGCAGGCA-3'
引物4：5'-CGCTCTAGAACTAGTGGATCCCAAAGCCTCGTGAGCCTTAATC-3'
（3）②過程（融合PCR）是采用具有互補(bǔ)末端引物，形成具有重疊鏈的PCR引物，通過PCR引物重疊鏈的延伸，從而將不同來源的DNA片段連接起來。下列引物5、引物6用于擴(kuò)增兩端含loxP的karR片段，引物5、引物6可分別與 引物2引物2、引物3引物3（引物1、引物2、引物3、引物4）重疊從而實(shí)現(xiàn)不同DNA片段的連接。
引物5：5'-CGTCAACACCGGAAAACTTAAATCCCAATACGACTCACTATAGGGCG-3'
引物6：5-TGCCTGCATTAACAAGCGATTAACGCGCAATTAACCCTCACTAAAG-3'
（4）④過程將質(zhì)粒3導(dǎo)入 感受感受態(tài)谷氨酸棒狀桿菌，⑤過程在同源重組的作用下谷氨酸棒狀桿菌株的argR基因被替換為 兩端含有l(wèi)oxP位點(diǎn)的karR兩端含有l(wèi)oxP位點(diǎn)的karR片段。
（5）⑥過程導(dǎo)入質(zhì)粒4的目的是 利用重組酶Cre識別loxP位點(diǎn)并發(fā)生重組反應(yīng)，去除基因組上的karR基因利用重組酶Cre識別loxP位點(diǎn)并發(fā)生重組反應(yīng)，去除基因組上的karR基因。
（6）由于質(zhì)粒4的溫敏特性，⑦過程先在37℃條件下培養(yǎng)消除質(zhì)粒4，然后用影印接種（A、B、C三個(gè)培養(yǎng)基中接種菌種的位置相同）培養(yǎng)驗(yàn)證其抗性，其結(jié)果如下圖，則 能在A培養(yǎng)基上生長，不能在B、C培養(yǎng)基上生長的菌株能在A培養(yǎng)基上生長，不能在B、C培養(yǎng)基上生長的菌株是目的基因被敲除的目的菌株。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】dNTP；Taq酶；AAGCTT；GGATCC；引物2；引物3；感受；兩端含有l(wèi)oxP位點(diǎn)的karR；利用重組酶Cre識別loxP位點(diǎn)并發(fā)生重組反應(yīng)，去除基因組上的karR基因；能在A培養(yǎng)基上生長，不能在B、C培養(yǎng)基上生長的菌株
【解答】
【點(diǎn)評】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：46引用：3難度：0.6
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時(shí)，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
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