Gateway克隆技術是一種快速，高效地構建基因表達載體的方法，是基于λ噬菌體可以和大腸桿菌DNA的特定位點發(fā)生互換的特點設計的。Gateway克隆技術依賴于BP反應和LR反應，通過BP反應將目的基因連接到質(zhì)粒1上，獲得克隆質(zhì)粒2，再通過LR反應將目的基因連接到載體質(zhì)粒3上，獲得表達載體，如圖所示。請回答下列問題：
（1）為構建基因表達載體，需先設計引物，通過PCR特異性擴增目的基因，用于擴增目的基因的引物需滿足的條件是 能與目的基因兩端的堿基序列互補配對能與目的基因兩端的堿基序列互補配對，為使PCR產(chǎn)物能參與后續(xù)交換，需要分別在2種引物上添加相應的attB1和attB2序列，該序列應添加在引物的 5′端5′端（填“3′端”或“5′端”）。
（2）BP反應中，將帶有attB1和attB2序列的目的基因與質(zhì)粒1混合，加入BP克隆酶，attB和attP位點之間會發(fā)生互換。該反應體系中可能含有未交換的質(zhì)粒1和交換后的質(zhì)粒2，為從體系中篩選出質(zhì)粒2，使混合體系中的質(zhì)粒分別轉化用Ca2+處理的大腸桿菌，并涂布到含有青霉素的平板上。Ca2+處理的目的是 使大腸桿菌處于能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)使大腸桿菌處于能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)。理論上，在平板上長出菌落的大腸桿菌中含有的質(zhì)粒即為質(zhì)粒2，理由是 質(zhì)粒2含有青霉素抗性基因且不具有ccdB基因，導入該質(zhì)粒的大腸桿菌能在含青霉素的平板上增殖；而質(zhì)粒1含有ccdB基因，其表達的產(chǎn)物能抑制大腸桿菌的增殖質(zhì)粒2含有青霉素抗性基因且不具有ccdB基因，導入該質(zhì)粒的大腸桿菌能在含青霉素的平板上增殖；而質(zhì)粒1含有ccdB基因，其表達的產(chǎn)物能抑制大腸桿菌的增殖。
（3）LR反應中，將質(zhì)粒2和質(zhì)粒3混合，加入LR克隆酶，attL和attR位點之間會發(fā)生互換。為從反應體系中篩選出最終的基因表達載體，應將轉化后的大腸桿菌涂布到含有 卡那霉素卡那霉素的平板上。獲得的基因表達載體除含有圖示的目的基因和卡那霉素抗性基因外，還必須有 啟動子和終止子啟動子和終止子等。
（4）在LR反應體系中，相應片段發(fā)生互換后，所得產(chǎn)物 不能不能（填“能”或“不能”）再次互換回到初始狀態(tài)，原因是 attL與attR序列互換后序列發(fā)生改變，而體系中的LR克隆酶具有專一性attL與attR序列互換后序列發(fā)生改變，而體系中的LR克隆酶具有專一性。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】能與目的基因兩端的堿基序列互補配對；5′端；使大腸桿菌處于能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)；質(zhì)粒2含有青霉素抗性基因且不具有ccdB基因，導入該質(zhì)粒的大腸桿菌能在含青霉素的平板上增殖；而質(zhì)粒1含有ccdB基因，其表達的產(chǎn)物能抑制大腸桿菌的增殖；卡那霉素；啟動子和終止子；不能；attL與attR序列互換后序列發(fā)生改變，而體系中的LR克隆酶具有專一性
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/7/22 8:0:9組卷：7引用：2難度：0.6
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1．下列有關基因工程技術和蛋白質(zhì)工程技術敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6