炎癥性腸?。↖BD）是一種易導(dǎo)致結(jié)腸癌的慢性疾病，患者腸道內(nèi)會(huì)產(chǎn)生硫代硫酸鹽，且生成量與疾病嚴(yán)重程度正相關(guān)。為簡(jiǎn)化疾病診斷和精確用藥，科研人員開(kāi)發(fā)了智能工程菌。

（1）科研人員將抗炎蛋白基因與硫代硫酸鹽特異性誘導(dǎo)激活的啟動(dòng)子P連接，構(gòu)建出圖1所示表達(dá)載體。先用Ca²⁺處理大腸桿菌細(xì)胞，使細(xì)胞處于

能吸收周?chē)h(huán)境中DNA分子

能吸收周?chē)h(huán)境中DNA分子

的生理狀態(tài)，再將表達(dá)載體導(dǎo)入其中，篩選得到菌株E。飼喂菌株E的IBD小鼠癥狀明顯緩解。選用啟動(dòng)子P的優(yōu)點(diǎn)是僅在IBD發(fā)生時(shí)才表達(dá)抗炎蛋白且

表達(dá)量與IBD程度正相關(guān)

表達(dá)量與IBD程度正相關(guān)

，能精準(zhǔn)治療IBD。
（2）科研人員擬向菌株E中導(dǎo)入新元件，得到菌株Ec,以通過(guò)觀察飼喂菌株Ec的小鼠糞便中的熒光情況來(lái)診斷IBD嚴(yán)重程度。制備新元件有圖2所示兩種方案。
①與方案1相比，方案2的主要優(yōu)勢(shì)是排除不同的小鼠糞便樣品中

Ec菌數(shù)量差異

Ec菌數(shù)量差異

對(duì)診斷結(jié)果的影響。
②利用方案2所獲得的Ec菌飼喂IBD小鼠后，若糞便樣品中僅發(fā)紅色熒光的菌為x個(gè)，同時(shí)發(fā)紅色和綠色熒光的菌為y個(gè)，則反映IBD發(fā)病程度的數(shù)學(xué)表達(dá)式為

y

y

+

x

y

y

+

x

。
（3）硫代硫酸鹽易被分解，因此Ec菌熒光情況的觀察只能反映觀察時(shí)刻的情況。為了讓曾經(jīng)患過(guò)IBD的情況被記錄下來(lái)，科研人員繼續(xù)向菌株Ec中導(dǎo)入含圖3所示元件的表達(dá)載體，得到智能工程菌R。正常的LacZ基因編碼的蛋白可使大腸桿菌菌落在含X-gal（無(wú)色）的培養(yǎng)基上呈現(xiàn)藍(lán)色。突變基因A-LacZ無(wú)法表達(dá)LacZ酶，B-sgRNA能使突變基因A-LacZ恢復(fù)正常序列。
給小鼠飼喂智能工程菌R后，收集小鼠糞便中的工程菌R，將工程菌R涂布在含

X-gal

X-gal

的平板上，若

出現(xiàn)藍(lán)色菌落

出現(xiàn)藍(lán)色菌落

，則說(shuō)明小鼠曾患IBD。
（4）為將工程菌R用于臨床診斷和治療，請(qǐng)?zhí)岢鱿乱徊綉?yīng)該研究的問(wèn)題

研究R菌對(duì)人類腸道穩(wěn)態(tài)是否有負(fù)面影響

研究R菌對(duì)人類腸道穩(wěn)態(tài)是否有負(fù)面影響

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