現(xiàn)代生物技術(shù)在醫(yī)藥領(lǐng)域有廣泛應(yīng)用。將人體中B蛋白基因?qū)氪竽c桿菌，以生產(chǎn)藥物B蛋白?；卮鹣铝袉栴}：
（1）將B蛋白基因?qū)氪竽c桿菌，不能直接從人類基因文庫(kù)中獲取B蛋白基因，原因是

人體基因的轉(zhuǎn)錄初始產(chǎn)物需切除部分序列，才能加工成為成熟的mRNA，大腸桿菌沒有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，B蛋白基因無法正常表達(dá)

人體基因的轉(zhuǎn)錄初始產(chǎn)物需切除部分序列，才能加工成為成熟的mRNA，大腸桿菌沒有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，B蛋白基因無法正常表達(dá)

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（2）為獲取B蛋白基因，需要在人體細(xì)胞內(nèi)提取的

mRNA

mRNA

經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA，cDNA中

不含

不含

（填“含有”或“不含”）內(nèi)含子序列。利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，a和b表示兩種引物，這兩種引物的堿基序列不能互補(bǔ)，原因是

a和b引物若能互補(bǔ)會(huì)發(fā)生配對(duì)，從而會(huì)減弱與目的基因的結(jié)合

a和b引物若能互補(bǔ)會(huì)發(fā)生配對(duì)，從而會(huì)減弱與目的基因的結(jié)合

。
（3）導(dǎo)入過程所用載體pUC19質(zhì)粒如圖所示，LacZ基因表達(dá)產(chǎn)物能水解X-gal,使菌落呈藍(lán)色，不能水解X-gal的菌落呈白色。已知三種限制性核酸內(nèi)切酶X、Y、Z所識(shí)別的序列分別是C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC（↓表示剪切點(diǎn)）。為便于篩選導(dǎo)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌，應(yīng)選用

酶Y和DNA連接

酶Y和DNA連接

酶將該質(zhì)粒與目的基因構(gòu)建為重組質(zhì)粒，并且在培養(yǎng)基中加入

氨芐青霉素、X-gal

氨芐青霉素、X-gal

，接種培養(yǎng)后選擇

白

白

色菌落。
（4）篩選得到成功導(dǎo)入B蛋白基因的大腸桿菌菌株，為檢驗(yàn)B蛋白基因是否表達(dá)，可以用含放射性標(biāo)記的B蛋白基因單鏈作為探針，檢測(cè)受體菌有無

成功轉(zhuǎn)錄（合成相應(yīng)RNA）

成功轉(zhuǎn)錄（合成相應(yīng)RNA）

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