家禽的飼料中富含谷物，纖維素是谷物的重要成分，但家禽消化道中缺少能降解纖維素的酶，阻礙了家禽對飼料的吸收與利用。研究人員利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)改造乳酸桿菌，將其添加到飼料中，以提高家禽養(yǎng)殖效率。枯草芽孢桿菌能分泌一種可降解纖維素的酶，這種酶由W基因編碼。為在乳酸桿菌中表達W基因，需使用圖1中質(zhì)粒作為載體，圖2為含W基因的DNA片段?；卮鹣铝袉栴}：

（1）常見的乳酸菌除乳酸桿菌外，還有

乳酸鏈球菌

乳酸鏈球菌

。家禽腸道內(nèi)的乳酸桿菌可利用葡萄糖通過細胞呼吸產(chǎn)生酸性物質(zhì)，抑制有害細菌的生長和繁殖，維持腸道的正常功能，請寫出相關(guān)的反應(yīng)式：

C₆H₁₂O₆

酶

2C₃H₆O₃+能量

C₆H₁₂O₆

酶

2C₃H₆O₃+能量

。
（2）利用PCR技術(shù)擴增W基因時，用到的DNA聚合酶與普通的酶相比，具有的特點是

耐高溫

耐高溫

。擴增完成后，常采用

瓊脂糖凝膠電泳

瓊脂糖凝膠電泳

法來鑒定PCR的產(chǎn)物。為得到含W基因的乳酸桿菌，可采用平板劃線法純化乳酸桿菌，進行劃線操作要注意：

從第一次劃線的末端開始進行第二次劃線；不要將最后一次的劃線與第一次的劃線相連；每次劃線前要灼燒接種環(huán)；在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)

從第一次劃線的末端開始進行第二次劃線；不要將最后一次的劃線與第一次的劃線相連；每次劃線前要灼燒接種環(huán)；在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)

（寫出2點即可）。
（3）W基因以乙鏈為轉(zhuǎn)錄模板鏈，轉(zhuǎn)錄時mRNA自身延伸的方向為5'→3'。下表是幾種限制酶的識別序列及切割位點，圖1、圖2標注了相關(guān)限制酶的酶切位點。為獲得能正確表達W基因的重組質(zhì)粒，應(yīng)分別使用哪些限制酶對質(zhì)粒和含W基因的DNA片段進行切割？

質(zhì)粒：限制酶HindⅢ、MfeⅠ；含W基因的DNA片段：限制酶HindⅢ、EcoRⅠ

質(zhì)粒：限制酶HindⅢ、MfeⅠ；含W基因的DNA片段：限制酶HindⅢ、EcoRⅠ

。

限制酶	EcoRⅠ	BamHⅠ	KpnⅠ	MfeⅠ	HindⅢ
識別位點	5'-G↓AATTC-3' 3'-CTTAA↑G-5'	5'-G↓GATCC-3' 3'-CCTAG↑G-5'	5'-G↓GTACC-3' 3'-CCATG↑G-5'	5'-C↓AATTG-3' 3'-GTTAA↑C-5'	5'-A↓AGCTT-3' 3'-TTCGA↑A-5'