科學(xué)家將tetX基因（四環(huán)素降解酶基因）和pET28a質(zhì)粒結(jié)合，導(dǎo)入大腸桿菌，通過發(fā)酵可生產(chǎn)四環(huán)素降解酶。某DNA分子上tetX基因片段附近和pET28a質(zhì)粒上的限制酶酶切位點(diǎn)如圖1所示，其中BamHⅠ的識(shí)別序列為5'G↓GATCC3'，NdeⅠ的識(shí)別序列是5'CA↓TATG3'。圖2表示利用PCR技術(shù)從某DNA中獲取tetX基因的一個(gè)環(huán)節(jié)?；卮鹣铝袉栴}：

（1）基因轉(zhuǎn)錄時(shí)，3'端在啟動(dòng)子端的單鏈充當(dāng)模板，為保證tetX基因能用β鏈充當(dāng)轉(zhuǎn)錄模板，設(shè)計(jì)引物時(shí)最好在圖2所示引物Ⅰ的5端方框位置添加3'

GTATAC

GTATAC

5'序列，經(jīng)PCR擴(kuò)增后，獲得足量目的基因片段，再用

BamHⅠ和NdeⅠ

BamHⅠ和NdeⅠ

酶切割質(zhì)粒和tetX基因兩端，從而構(gòu)建重組質(zhì)粒。
（2）某同學(xué)用PCR儀擴(kuò)增tetX基因時(shí)，加入（2ⁿ-1）對(duì)引物，引物Ⅰ（3'CGCGAA?AATGC5'）和引物Ⅱ（5'CACTC?GCGCTT3'）各半，其他條件符合要求，發(fā)現(xiàn)最終產(chǎn)物中tetX基因數(shù)量遠(yuǎn)少于2ⁿ個(gè)，試從所用引物Ⅰ和引物Ⅱ序列的角度，分析原因

復(fù)性時(shí)，部分引物Ⅰ和引物Ⅱ的3'端序列可以相互配對(duì)形成雙鏈，升高溫度后它們未配對(duì)的部分可互為模板進(jìn)行延伸

復(fù)性時(shí)，部分引物Ⅰ和引物Ⅱ的3'端序列可以相互配對(duì)形成雙鏈，升高溫度后它們未配對(duì)的部分可互為模板進(jìn)行延伸

，這種情況的存在，也是PCR產(chǎn)物需要利用

（瓊脂糖）凝膠電泳

（瓊脂糖）凝膠電泳

進(jìn)行鑒定的原因之一。
（3）tetX基因隨上述重組質(zhì)粒進(jìn)入大腸桿菌中穩(wěn)定存在并表達(dá)的過程稱為

轉(zhuǎn)化

轉(zhuǎn)化

。充當(dāng)受體菌的大腸桿菌應(yīng)

不抗

不抗

（“抗”或“不抗”）卡那霉素，在含卡那霉素的培養(yǎng)基上能形成菌落的受體菌中未必含tetX基因，原因是

只轉(zhuǎn)入未攜帶tetX基因的pET28a質(zhì)粒的大腸桿菌也可以在含卡那霉素的培養(yǎng)基中存活

只轉(zhuǎn)入未攜帶tetX基因的pET28a質(zhì)粒的大腸桿菌也可以在含卡那霉素的培養(yǎng)基中存活

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