對疑似PRRS（豬繁殖與呼吸綜合征）的病料（從得病的動物身上采集的組織或器官）進行病毒分離鑒定，獲得一株高致病性PRRSV（豬繁殖與呼吸綜合征病毒），通過對高致病性PRRSV的N蛋白進行研究來探討該蛋白的抗原特性，并制備抗N蛋白的單克隆抗體?；卮鹣铝袉栴}：
（1）PRRSV N蛋白基因的克?。禾崛RRSV中的總RNA，以其中相應(yīng)的RNA作為模板，利用逆轉(zhuǎn)錄逆轉(zhuǎn)錄酶逆轉(zhuǎn)錄成cDNA．再以cDNA為模板進行PCRPCR擴增，而獲得N蛋白基因。
（2）表達N蛋白細胞的制備：用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化合適的大腸桿菌細胞，為提高該過程的效率，需考慮重組質(zhì)粒的質(zhì)量和濃度質(zhì)量和濃度等。將篩選過的受體細胞37℃培養(yǎng)液培養(yǎng)。
（3）單克隆抗體的制備與檢測：取免疫小鼠的脾細胞與小鼠骨髓瘤細胞融合待融合細胞生長到培養(yǎng)孔底面積的110時進行抗體抗體（填物質(zhì)）篩選。檢出的陽性孔用有限稀釋法進行多次克隆化，建立單克隆抗體細胞株細胞株。最終獲得的單克隆抗體是否達到實驗要求的標志是N蛋白可與抗N蛋白的單抗發(fā)生特異性的結(jié)合N蛋白可與抗N蛋白的單抗發(fā)生特異性的結(jié)合，與無關(guān)蛋白不發(fā)生反應(yīng)。
（4）豬干細胞的應(yīng)用：胚胎干細胞可以進行基因敲除基因敲除，獲得適合猴子移植的豬器官，減弱或消除排斥反應(yīng)。
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【考點】單克隆抗體及其應(yīng)用．
【答案】逆轉(zhuǎn)錄；PCR；轉(zhuǎn)化；質(zhì)量和濃度；抗體；細胞株；N蛋白可與抗N蛋白的單抗發(fā)生特異性的結(jié)合；基因敲除
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：20引用：2難度：0.7
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1．CD47是一種跨膜糖蛋白，它可與巨噬細胞表面的信號調(diào)節(jié)蛋白結(jié)合，從而抑制巨噬細胞的吞噬作用。肺癌、結(jié)腸癌等多種腫瘤細胞表面的CD47含量比正常細胞高1.6～5倍，導致吞噬細胞對腫瘤細胞的清除效果減弱。科學家推測，抗CD47的單克隆抗體可以解除CD47對巨噬細胞的抑制作用，為此他們按照如圖流程進行了實驗。下列敘述正確的是（ ?。?br />
發(fā)布：2024/12/31 1:30:1組卷：7引用：3難度：0.6 -
2．雙特異性抗體是指一個抗體分子可以與兩個不同抗原或同一抗原的兩個不同抗原表位相結(jié)合，目前最常利用雜交瘤雜交法來制備。長春花是原產(chǎn)于非洲東海岸的野生花卉，其所含的長春堿具有良好的抗腫瘤作用。圖1是某雙特異性抗體作用圖。圖2是科研人員通過雜交—雜交瘤細胞技術(shù)（免疫的B淋巴細胞和雜交瘤細胞雜交技術(shù)）生產(chǎn)能同時識別癌胚抗原和長春堿的雙特異性單克隆抗體的部分過程。請分析回答下列問題：
（1）與植物體細胞雜交相比，圖2中過程②特有的誘導融合的方法是，過程②選用的骨髓瘤細胞（選填“能”或“不能”）在HAT培養(yǎng)基上生長。
（2）對③篩選出的雜交瘤細胞，還需進行和，才能篩選出足夠量的既能無限增殖又能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細胞。與傳統(tǒng)血清抗體相比，單克隆抗體最主要的優(yōu)點是（答出一點）。
（3）圖2中①步驟注射癌胚抗原的目的是。圖2方框內(nèi)需要經(jīng)過次篩選，才能獲取單克隆雜交—雜交瘤細胞。體外培養(yǎng)到一定時期的單克隆雜交—雜交瘤細胞會因為、有害代謝物的積累和培養(yǎng)液中營養(yǎng)物質(zhì)缺乏等因素而分裂受阻，需進行傳代培養(yǎng)。
（4）與直接使用長春堿相比，將長春堿與雙特異性單克隆抗體結(jié)合后給藥，對人體的副作用更小，原因是。發(fā)布：2024/12/31 1:30:1組卷：21引用：4難度：0.5 -
3．使用高效的細胞毒素藥物進行化療可以有效殺傷腫瘤細胞但細胞毒素沒有特異性，在殺傷腫瘤細胞的同時還會對健康細胞造成傷害。這限制了它在臨床上的應(yīng)用?？贵w一藥物偶聯(lián)物（ADC）通過將細胞毒素與能特異性識別腫瘤抗原的單克隆抗體結(jié)合，實現(xiàn)了對腫瘤細胞的選擇性殺傷ADC通常由抗體、接頭和藥物（如細胞毒素）三部分組成，它的作用機制如圖所示。下列敘述正確的是（ ?。?br />
發(fā)布：2024/12/31 3:30:1組卷：18引用：2難度：0.7
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