某小組為研究真菌基因m的功能，構(gòu)建了融合表達(dá)蛋白M和tag標(biāo)簽的質(zhì)粒。請(qǐng)結(jié)合實(shí)驗(yàn)流程回答下列問(wèn)題。
（1）目的基因的擴(kuò)增
①提取真菌細(xì)胞 mRNAmRNA，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄獲得cDNA，進(jìn)一步獲得基因m片段。
②為了獲得融合tag標(biāo)簽的蛋白M，設(shè)計(jì)引物P2時(shí)，不能包含基因m終止密碼子的編碼序列，否則將導(dǎo)致 蛋白M上不含tag標(biāo)簽蛋白M上不含tag標(biāo)簽。
（2）重組質(zhì)粒的構(gòu)建
①將SmaⅠ切開(kāi)的載體A與添加同源序列的m混合，用特定DNA酶處理形成 黏性末端黏性末端，然后降溫以促進(jìn) 黏性末端堿基互補(bǔ)配對(duì)黏性末端堿基互補(bǔ)配對(duì)，形成A-m結(jié)合體。將A-m結(jié)合體導(dǎo)入大腸桿菌，利用大腸桿菌中的DNA聚合酶及 DNA連接DNA連接酶等，完成質(zhì)粒的環(huán)化。
②若正確構(gòu)建的重組質(zhì)粒A-m仍能被SmaⅠ切開(kāi)，則SmaⅠ的酶切位點(diǎn)可能在 基因m的連接處、基因m的內(nèi)部基因m的連接處、基因m的內(nèi)部。
（3）融合蛋白的表達(dá)
①用含有尿嘧啶的培養(yǎng)基培養(yǎng)URA3基因缺失型酵母，將其作為受體菌，導(dǎo)入質(zhì)粒A-m,然后涂布于 無(wú)尿嘧啶無(wú)尿嘧啶的培養(yǎng)基上，篩選獲得目的菌株，其機(jī)理是 受體菌在無(wú)尿嘧啶的培養(yǎng)基上無(wú)法生長(zhǎng)，導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體菌含有URA3基因，可以長(zhǎng)成菌落受體菌在無(wú)尿嘧啶的培養(yǎng)基上無(wú)法生長(zhǎng)，導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體菌含有URA3基因，可以長(zhǎng)成菌落。
②若通過(guò)抗原—抗體雜交實(shí)驗(yàn)檢測(cè)到酵母蛋白中含tag標(biāo)簽，說(shuō)明 融合基因表達(dá)（或融合基因正確解碼）融合基因表達(dá)（或融合基因正確解碼），后續(xù)實(shí)驗(yàn)可借助tag標(biāo)簽進(jìn)行蛋白M的分離純化。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合．
【答案】mRNA；蛋白M上不含tag標(biāo)簽；黏性末端；黏性末端堿基互補(bǔ)配對(duì)；DNA連接；基因m的連接處、基因m的內(nèi)部；無(wú)尿嘧啶；受體菌在無(wú)尿嘧啶的培養(yǎng)基上無(wú)法生長(zhǎng)，導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體菌含有URA3基因，可以長(zhǎng)成菌落；融合基因表達(dá)（或融合基因正確解碼）
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：18引用：1難度：0.6
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
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發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過(guò)基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力。回答下列問(wèn)題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫(kù)中獲得?；蛭膸?kù)包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開(kāi)始時(shí)，解開(kāi)DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過(guò)程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來(lái)的酶，常見(jiàn)的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒(méi)有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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