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胰島素作為治療糖尿病的特效藥,市場潛力巨大,科學(xué)家利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)獲得轉(zhuǎn)入胰島素基因的大腸桿菌,通過發(fā)酵工程,實現(xiàn)胰島素的大量生產(chǎn)。圖1表示胰島素基因及其上的限制酶酶切位點(diǎn),圖2表示所用質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)?;卮鹨韵聠栴}。
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(1)已知DNA復(fù)制時,子鏈延伸的方向是從5′→3′,即沿著模板鏈的3′→5′。若要擴(kuò)增出胰島素基因并用于表達(dá)載體的構(gòu)建,應(yīng)選擇的引物是
引物1和引物8
引物1和引物8
,選擇這兩種引物的原因是
既能保證正常合成子鏈,又包含限制酶切割位點(diǎn)
既能保證正常合成子鏈,又包含限制酶切割位點(diǎn)
。若要得到胰島素基因,至少經(jīng)過
3
3
次循環(huán)。
(2)構(gòu)建基因表達(dá)載體時,最好選擇的限制酶是
BamHⅠ和HindⅢ
BamHⅠ和HindⅢ
,原因是
既能防止質(zhì)粒自身環(huán)化,又可以保證目的基因正確連接在質(zhì)粒上
既能防止質(zhì)粒自身環(huán)化,又可以保證目的基因正確連接在質(zhì)粒上
。
(3)將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌時,需用
Ca2+
Ca2+
處理大腸桿菌,其目的是
使大腸桿菌變?yōu)楦惺軕B(tài)細(xì)胞,便于從周圍環(huán)境吸收DNA分子
使大腸桿菌變?yōu)楦惺軕B(tài)細(xì)胞,便于從周圍環(huán)境吸收DNA分子
。
(4)為了將成功導(dǎo)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌篩選出來,甲同學(xué)在加入氨芐青霉素的培養(yǎng)基中進(jìn)行接種,結(jié)果如圖3。乙同學(xué)認(rèn)為該結(jié)果得到的菌落并不都是成功導(dǎo)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌,你認(rèn)為乙同學(xué)判斷的理由是
只導(dǎo)入了質(zhì)粒的大腸桿菌也能在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上形成菌落
只導(dǎo)入了質(zhì)粒的大腸桿菌也能在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上形成菌落
。

【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合
【答案】引物1和引物8;既能保證正常合成子鏈,又包含限制酶切割位點(diǎn);3;BamHⅠ和HindⅢ;既能防止質(zhì)粒自身環(huán)化,又可以保證目的基因正確連接在質(zhì)粒上;Ca2+;使大腸桿菌變?yōu)楦惺軕B(tài)細(xì)胞,便于從周圍環(huán)境吸收DNA分子;只導(dǎo)入了質(zhì)粒的大腸桿菌也能在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上形成菌落
【解答】
【點(diǎn)評】
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發(fā)布:2024/4/20 14:35:0組卷:36引用:3難度:0.7
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