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基因打靶技術是建立在基因同源重組技術以及胚胎干細胞技術的基礎上而發(fā)展起來的一種分子生物學技術。請結合圖示回答下列有關問題:
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注:neor是新霉素抗性基因;tk基因的表達可以使無毒的丙氧鳥苷代謝為毒性物質(zhì),導致細胞死亡。
(1)將目的基因和與細胞內(nèi)靶基因同源的DNA片段都重組到
載體(或質(zhì)粒)
載體(或質(zhì)粒)
上,構建打靶載體(基因表達載體)。
(2)打靶載體測序驗證正確后,利用
限制
限制
酶,將之線性化,以提高重組率。通過
顯微注射
顯微注射
技術將打靶載體導入胚胎干細胞,這樣打靶載體和與細胞內(nèi)靶基因同源的區(qū)段就有機會發(fā)生同源重組。
(3)為了篩選發(fā)生同源重組的細胞,可在培養(yǎng)液中加入
新霉素和丙氧鳥苷
新霉素和丙氧鳥苷
。最后還需要通過
DNA分子雜交
DNA分子雜交
技術鑒定同源重組的細胞(去除靶基因),將這樣的細胞通過動物細胞培養(yǎng)后,獲得大量打靶成功的細胞。其中,暫時不用的細胞進行
液氮(或冷凍)
液氮(或冷凍)
保存。
(4)將打靶成功的細胞注射入小鼠囊胚,移植到同種、
生理狀態(tài)相同(或經(jīng)同期發(fā)情處理)
生理狀態(tài)相同(或經(jīng)同期發(fā)情處理)
的母鼠體內(nèi),一段時間后對受體母鼠進行妊娠檢查,確保其生下嵌合體小鼠。這種嵌合體小鼠長大后,體內(nèi)同時存在被“修飾”過的基因和未被“修飾”的基因。如果某些小鼠的
生殖細胞
生殖細胞
(填“體細胞”或“生殖細胞”)恰巧被“修飾”過了,則它們的雜交后代中,就可能出現(xiàn)基因完全被“修飾”過的小鼠。

【答案】載體(或質(zhì)粒);限制;顯微注射;新霉素和丙氧鳥苷;DNA分子雜交;液氮(或冷凍);生理狀態(tài)相同(或經(jīng)同期發(fā)情處理);生殖細胞
【解答】
【點評】
聲明:本試題解析著作權屬菁優(yōu)網(wǎng)所有,未經(jīng)書面同意,不得復制發(fā)布。
發(fā)布:2024/4/20 14:35:0組卷:85引用:5難度:0.7
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