圖1為胰島素基因結(jié)構(gòu)，圖2為pBR322質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)示意圖，圖中EcorⅠ、SmaⅠ、BamHⅠ和HindⅢ為限制酶，箭頭或線段所指為位點(diǎn)對應(yīng)酶切位點(diǎn)。研究人員欲用此質(zhì)粒構(gòu)建胰島素基因的表達(dá)載體，培育能產(chǎn)生人胰島素的大腸桿菌。請回答下列相關(guān)問題：
（1）若要進(jìn)行胰島素基因的擴(kuò)增，常采用PCR技術(shù)，該技術(shù)的原理是 DNA雙鏈復(fù)制DNA雙鏈復(fù)制。使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是 加熱到90～95℃加熱到90～95℃。
（2）已知DNA新鏈的合成方向是5′→3′，若利用圖2中的質(zhì)粒構(gòu)建基因表達(dá)載體，應(yīng)該選擇的引物為 引物4和引物5引物4和引物5。目前在PCR反應(yīng)中使用Taq酶而不使用大腸桿菌DNA聚合酶的主要原因 Taq酶熱穩(wěn)定性高，而大腸桿菌DNA聚合酶在高溫下會(huì)失活Taq酶熱穩(wěn)定性高，而大腸桿菌DNA聚合酶在高溫下會(huì)失活。
（3）在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，選擇 BamHⅠ和HindⅢBamHⅠ和HindⅢ作為切割質(zhì)粒和目的基因的限制酶，可提高目的基因和運(yùn)載體的正確連接效率，避免目的基因末端發(fā)生任意連接。
（4）成功構(gòu)建的基因表達(dá)載體應(yīng)含有人胰島素基因、標(biāo)記基因、啟動(dòng)子及終止子等，其中標(biāo)記基因的作用是 鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因，并把含有目的基因的受體細(xì)胞篩選出來鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因，并把含有目的基因的受體細(xì)胞篩選出來。
（5）限制酶的特點(diǎn)是 能夠識(shí)別雙鏈DNA分子中的某種特定序列，并在特定位點(diǎn)切割DNA分子能夠識(shí)別雙鏈DNA分子中的某種特定序列，并在特定位點(diǎn)切割DNA分子。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】DNA雙鏈復(fù)制；加熱到90～95℃；引物4和引物5；Taq酶熱穩(wěn)定性高，而大腸桿菌DNA聚合酶在高溫下會(huì)失活；BamHⅠ和HindⅢ；鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因，并把含有目的基因的受體細(xì)胞篩選出來；能夠識(shí)別雙鏈DNA分子中的某種特定序列，并在特定位點(diǎn)切割DNA分子
【解答】
【點(diǎn)評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：12引用：1難度：0.4
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發(fā)布：2024/12/20 5:0:2組卷：35引用：5難度：0.6 -
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（1）獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種過程中應(yīng)用的生物技術(shù)有（答出2項(xiàng)）等。
（2）為確保目的基因定向插入了質(zhì)粒，應(yīng)該選擇（填酶）切割目的基因和質(zhì)粒。在培養(yǎng)基中加入（填“氨芐青霉素”或“四環(huán)素”）對目的基因進(jìn)行篩選。
（3）培育轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種的核心工作是圖中過程（填序號(hào)）。過程②③采用的方法是。
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限制酶 BamHⅠ EcoRⅠ HindⅠ NbeⅠ MunⅠ 識(shí)別序列及切割位點(diǎn) G↓CATCC G↓AATTC A↓AGCTT G↓CTAGC C↓AATTG 
發(fā)布：2024/12/20 3:30:1組卷：6引用：1難度：0.6
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