棉蚜吸食棉花汁液，易造成棉花葉片的萎蔫、落花、落鈴等危害。雪花蓮凝集素基因（GNA）和尾穗莧凝集素基因（ACA）是兩種抗蚜蟲(chóng)基因，研究人員通過(guò)一定方法連接形成融合基因（GA），并將該融合基因與載體（pBI121）結(jié)合獲得基因表達(dá)載體pBI-GA，進(jìn)而導(dǎo)入棉花細(xì)胞中獲得轉(zhuǎn)GA抗蟲(chóng)棉植株，如圖所示。圖中KpnⅠ、BsaBⅠ、XhoⅠ為不同限制酶。請(qǐng)回答。
（1）為獲得GA，先采用PCR技術(shù)擴(kuò)增GNA和ACA，擴(kuò)增時(shí)先加熱至90-95℃使DNA解鏈后，冷卻至55～60℃有利于 引物與模板鏈結(jié)合或引物與模板鏈的堿基互補(bǔ)配對(duì)（引物與模板鏈之間形成氫鍵）引物與模板鏈結(jié)合或引物與模板鏈的堿基互補(bǔ)配對(duì)（引物與模板鏈之間形成氫鍵）。待擴(kuò)增出足夠的GNA和ACA的基礎(chǔ)上，使用限制酶BsaBⅠ和 T4T4DNA連接酶處理GNA和ACA，從而獲得GA。
（2）構(gòu)建表達(dá)載體pBI-GA是轉(zhuǎn)GA抗蟲(chóng)棉培育的核心，目的是 使GA基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且遺傳給下一代，同時(shí)使GA能夠表達(dá)發(fā)揮作用使GA基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且遺傳給下一代，同時(shí)使GA能夠表達(dá)發(fā)揮作用。使用限制酶KpnⅠ和XhoⅠ分別切割GA和pBI121的理由是 KpnI和XhoI切割產(chǎn)生不同的黏性末端；而DNA連接時(shí)，要求兩個(gè)黏性末端相同才能連接KpnI和XhoI切割產(chǎn)生不同的黏性末端；而DNA連接時(shí)，要求兩個(gè)黏性末端相同才能連接，從而實(shí)現(xiàn)定向連接。
（3）將導(dǎo)入表達(dá)載體的農(nóng)桿菌與棉花無(wú)菌苗下胚軸細(xì)胞共同培養(yǎng)?？梢韵蚺囵B(yǎng)基中添加 卡那霉素卡那霉素篩選分離出含表達(dá)載體的棉花無(wú)菌苗下胚軸細(xì)胞，誘導(dǎo)形成愈傷組織。
（4）轉(zhuǎn)GA抗蟲(chóng)棉對(duì)棉蚜有較好的抗性，其安全性也需要引起重視。從基因安全的角度考慮，培育和種植過(guò)程需要完成下列哪些工作？ACDACD。
A．轉(zhuǎn)化前與序列數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)，評(píng)估GA的安全性
B．種植轉(zhuǎn)GA抗蟲(chóng)棉過(guò)程注意合理密植，加強(qiáng)水肥管理
C．轉(zhuǎn)化過(guò)程殘留農(nóng)桿菌及其廢棄的培養(yǎng)基等，經(jīng)高溫滅菌后專門化處理
D．轉(zhuǎn)GA抗蟲(chóng)棉移植到大田后，要?jiǎng)澏ǜ綦x區(qū)，防止GA通過(guò)花粉傳播
【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合．
【答案】引物與模板鏈結(jié)合或引物與模板鏈的堿基互補(bǔ)配對(duì)（引物與模板鏈之間形成氫鍵）；T4；使GA基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且遺傳給下一代，同時(shí)使GA能夠表達(dá)發(fā)揮作用；KpnI和XhoI切割產(chǎn)生不同的黏性末端；而DNA連接時(shí)，要求兩個(gè)黏性末端相同才能連接；卡那霉素；ACD
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/5/13 8:0:8組卷：21引用：2難度：0.5
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過(guò)基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉?wèn)題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫(kù)中獲得。基因文庫(kù)包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開(kāi)始時(shí)，解開(kāi)DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過(guò)程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來(lái)的酶，常見(jiàn)的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒(méi)有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6 -
3．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7
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