纖維二糖酶可以將纖維二糖分解成葡萄糖和其他單糖。將來(lái)源于黑曲霉的纖維二糖酶基因 （CB） 和強(qiáng)啟動(dòng)子Pcbh1、終止子Tcbh1構(gòu)建成重組質(zhì)粒，獲得了高效表達(dá)纖維二糖酶的里氏木霉優(yōu)勢(shì)菌株。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：
（1）科研人員利用PCR擴(kuò)增黑曲霉的CB，請(qǐng)完成表格。
| PCR項(xiàng)目 | 相關(guān)操作 |
| 緩沖液 | PCR反應(yīng)緩沖液中一般要添加① Mg2+ Mg2+ |
| 模板、引物、原料和酶 | 提供DNA模板、2種引物、dNTP和Taq酶 |
| 反應(yīng)過(guò)程 | 每次循環(huán)依次分為② 變性、復(fù)性和延伸 變性、復(fù)性和延伸 三步 |
| 循環(huán)次數(shù) | 一次PCR一般要經(jīng)歷30次循環(huán) |
| 產(chǎn)物鑒定 | 常采用③ 瓊脂糖凝膠電泳 瓊脂糖凝膠電泳 方法來(lái)鑒定PCR的產(chǎn)物 |
2
2
的 5'
5'
端加入EcoRⅠ的識(shí)別序列，理由是 a鏈為轉(zhuǎn)錄的模板鏈，該鏈在強(qiáng)啟動(dòng)子PcbhI后的方向應(yīng)為3'→5’，因此引物2應(yīng)位于CB的上游，為使子鏈從引物2的3’端延伸，其5’端應(yīng)構(gòu)建EcoRI的酶切位點(diǎn)
a鏈為轉(zhuǎn)錄的模板鏈，該鏈在強(qiáng)啟動(dòng)子PcbhI后的方向應(yīng)為3'→5’，因此引物2應(yīng)位于CB的上游，為使子鏈從引物2的3’端延伸，其5’端應(yīng)構(gòu)建EcoRI的酶切位點(diǎn)
。
（3）為研究磷脂酶（PLC-E）與纖維二糖酶基因表達(dá)的關(guān)系，研究者構(gòu)建了高效沉默PLC-E基因的反向雙啟動(dòng)子載體，如圖3所示，其中TrpC和 Rp2為啟動(dòng)子，eGFP為增強(qiáng)綠色熒光蛋白基因，eGFP的作用是
篩選
篩選
。實(shí)驗(yàn)結(jié)果預(yù)測(cè)和分析：
①轉(zhuǎn)基因里氏木霉菌無(wú)綠色熒光，說(shuō)明PLC-E基因沉默，其機(jī)理是
在雙啟動(dòng)子作用下，轉(zhuǎn)錄形成的兩種RNA互補(bǔ)，產(chǎn)生雙鏈RNA，抑制翻譯，達(dá)到eGFP與PLC-E基因同時(shí)沉默的效果
在雙啟動(dòng)子作用下，轉(zhuǎn)錄形成的兩種RNA互補(bǔ)，產(chǎn)生雙鏈RNA，抑制翻譯，達(dá)到eGFP與PLC-E基因同時(shí)沉默的效果
。②與野生型相比，轉(zhuǎn)基因里氏木霉菌的纖維二糖酶含量顯著降低，說(shuō)明
磷脂酶促進(jìn)纖維二糖酶基因的表達(dá)
磷脂酶促進(jìn)纖維二糖酶基因的表達(dá)
。【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定；基因工程的操作過(guò)程綜合．
【答案】Mg2+；變性、復(fù)性和延伸；瓊脂糖凝膠電泳；2；5'；a鏈為轉(zhuǎn)錄的模板鏈，該鏈在強(qiáng)啟動(dòng)子PcbhI后的方向應(yīng)為3'→5’，因此引物2應(yīng)位于CB的上游，為使子鏈從引物2的3’端延伸，其5’端應(yīng)構(gòu)建EcoRI的酶切位點(diǎn)；篩選；在雙啟動(dòng)子作用下，轉(zhuǎn)錄形成的兩種RNA互補(bǔ)，產(chǎn)生雙鏈RNA，抑制翻譯，達(dá)到eGFP與PLC-E基因同時(shí)沉默的效果；磷脂酶促進(jìn)纖維二糖酶基因的表達(dá)
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/6/29 8:0:10組卷：50引用：1難度：0.5
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1．以下是有關(guān)分離與鑒別DNA的技術(shù)，其中說(shuō)法正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/15 16:30:6組卷：5引用：1難度：0.5 -
2．科研人員克隆了豬白細(xì)胞抗原基因（SLA-2基因），構(gòu)建了該基因的真核表達(dá)載體，進(jìn)行了豬腎上皮細(xì)胞表達(dá)研究。實(shí)驗(yàn)的主要流程如圖1，SLA-2基因長(zhǎng)度為1100bp,質(zhì)粒B的總長(zhǎng)度為4445bp,其限制酶切點(diǎn)后的數(shù)字表示距復(fù)制原點(diǎn)的距離。請(qǐng)回答：
（1）過(guò)程①中，PCR擴(kuò)增SLA-2的原理是限制酶 BclⅠ NotⅠ XbaⅠ San3AⅠ 識(shí)別序列及切割位點(diǎn) T↓GATCA GC↓GGCCGC T↓CTAGA ↓GATC ，下列4種引物中應(yīng)選擇的是。
a 5'-GCTCTAGAATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC
b 5'-GTTGCGGCCGCTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC
c 5'-GCGATCATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC
d 5'-GTTTGATCACTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC
（2）過(guò)程②將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌的目的是，該過(guò)程需要用處理大腸桿菌，使其成為感受態(tài)細(xì)胞。然后將大腸桿菌涂布在含有（抗生素）的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。
（3）若用Sau3AⅠ和XbaⅠ完全酶切質(zhì)粒C后電泳，請(qǐng)?jiān)诖痤}紙相應(yīng)位置畫出可能得到的電泳條帶。
（4）科研中常用呤霉素對(duì)真核細(xì)胞進(jìn)行篩選，一般選擇最低致死濃度的前一個(gè)濃度作為篩選濃度的原因是：既可以讓大部分沒(méi)有抗性的細(xì)胞死亡又不會(huì)讓。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果最佳的嘌霉素篩選濃度為。
（5）過(guò)程⑦研究人員用小鼠抗SLA抗原肽單克隆抗體檢測(cè)腎上皮細(xì)胞生產(chǎn)的抗原肽，其原理是，單克隆抗體能檢測(cè)其是否具有正確的，從而是否具有生物活性。
發(fā)布：2024/12/15 6:30:1組卷：42引用：3難度：0.6 -
3．下列關(guān)于“DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定”的實(shí)驗(yàn)，說(shuō)法錯(cuò)誤的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/15 6:30:1組卷：3引用：1難度：0.6
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