為獲得純合的轉(zhuǎn)K基因植株，某同學(xué)設(shè)計了一個實驗流程，其主要內(nèi)容如圖所示。

回答下列問題：
（1）天然的目的基因不滿足生產(chǎn)需求，研究人員設(shè)想通過易錯PCR技術(shù)引入隨機突變，再進(jìn)行定向篩選，獲得滿足需求的K基因。易錯PCR與普通PCR相似，每次循環(huán)也包括變性、退火、

延伸

延伸

三步，但可以通過改變PCR反應(yīng)條件來提高堿基錯配的幾率。研究發(fā)現(xiàn)Mg²⁺可以提高已發(fā)生錯配區(qū)域的穩(wěn)定性，Mn²⁺可以降低DNA聚合酶對底物的專一性，因此與普通PCR相比，易錯PCR反應(yīng)體系中應(yīng)適當(dāng)

A

A

。
A．提高M(jìn)g²⁺和Mn²⁺濃度
B．降低Mg²⁺和Mn²⁺濃度
C．提高M(jìn)g²⁺降低Mn²⁺濃度
D．降低Mg²⁺和提高M(jìn)n²⁺濃度
（2）農(nóng)桿菌廣泛分布在土壤中，若從土壤中分離農(nóng)桿菌，應(yīng)取

表層

表層

（表層/深層）土壤。圖中A感染愈傷組織的過程K基因隨

T-DNA片段

T-DNA片段

整合到植物細(xì)胞染色體上。
（3）組織培養(yǎng)過程中無菌操作是非常重要的。花粉在培養(yǎng)前需進(jìn)行消毒處理，不同物種、不同外植體對消毒試劑的反應(yīng)不同，所以應(yīng)恰當(dāng)選擇消毒試劑的

種類

種類

、

濃度

濃度

和處理時間。培養(yǎng)基滅菌后應(yīng)放置3-5天后使用，目的是使培養(yǎng)器皿內(nèi)的

水蒸氣

水蒸氣

揮發(fā)，并觀察培養(yǎng)基的

滅菌狀態(tài)

滅菌狀態(tài)

以保證外植體接種在無菌的培養(yǎng)基上。
（4）B過程將愈傷組織浸入高壓滅菌的

秋水仙素

秋水仙素

溶液中處理，再用

無菌水

無菌水

清洗后，接種于分化培養(yǎng)基上，再生植株。
（5）獲得二倍體植株后，若需檢測K基因是否存在于植株的不同組織細(xì)胞中，某同學(xué)用PCR方法進(jìn)行鑒定，在鑒定時應(yīng)以不同組織細(xì)胞中的

核DNA

核DNA

（填“mRNA”“總RNA”或“核DNA”）作為PCR模板。若要進(jìn)一步檢測K基因是否正確表達(dá)，應(yīng)檢測此植株中K基因的

表達(dá)產(chǎn)物

表達(dá)產(chǎn)物

，如果檢測結(jié)果呈陽性，再在田間試驗中檢測植株的

性狀

性狀

是否得到改變。