基因敲除又稱基因打靶，該技術(shù)通過外源DNA與染色體DNA之間的同源重組，進行精確的定點修飾和基因改造，具有專一性強、染色體DNA可與目的片段共同穩(wěn)定遺傳等特點?？捎糜诨蚬δ艿难芯亢蛦位蜻z傳病的治療。為研究小鼠細胞中基因X的功能，科學(xué)家通過同源重組法將小鼠胚胎干細胞中的基因X的活性消除并獲得嵌合體小鼠。在制備置換載體時，將neo^r基因（抗新霉素基因）作為置換基因X的插入突變，同時在neo^r基因外側(cè)添加HSV-tk基因，該基因的表達產(chǎn)物能將DHPG轉(zhuǎn)化為有毒物質(zhì)而使細胞死亡，如圖甲所示。置換載體導(dǎo)入ES細胞后，可發(fā)生同源重組和非同源重組，如圖乙所示。

（1）根據(jù)圖甲可知，在構(gòu)建基因X的置換載體時，需用相同的

限制酶

限制酶

酶切割基因X和

neo^r基因

neo^r基因

，該酶的切割位點應(yīng)位于

基因X的內(nèi)部和neo^r基因的兩端

基因X的內(nèi)部和neo^r基因的兩端

，用相同酶切的目的是

產(chǎn)生相同的黏性末端，便于被DNA連接酶連接

產(chǎn)生相同的黏性末端，便于被DNA連接酶連接

。
（2）ES細胞在功能上具有的特征是

發(fā)育的全能性

發(fā)育的全能性

，常用

顯微注射

顯微注射

技術(shù)將置換載體導(dǎo)入ES細胞，將置換載體導(dǎo)入ES細胞后，如何將發(fā)生同源重組的ES細胞篩選出來？并簡述理由。方法：

在培養(yǎng)基中加入新霉素和DHPG，培養(yǎng)導(dǎo)入置換載體的細胞

在培養(yǎng)基中加入新霉素和DHPG，培養(yǎng)導(dǎo)入置換載體的細胞

；理由：

未成功導(dǎo)入的ES細胞中不含neo^r基因，不抗新霉素，所以在培養(yǎng)基中無法存活。成功導(dǎo)入，但發(fā)生非同源重組的ES細胞中，HSK-tk基因可以表達，其產(chǎn)物會將培養(yǎng)基中的DHPG轉(zhuǎn)化為有毒物質(zhì)從而殺死ES細胞。只有發(fā)生同源重組的細胞，含有neo^r基因，同時無HSV-tk基因，可以在培養(yǎng)基中存活

未成功導(dǎo)入的ES細胞中不含neo^r基因，不抗新霉素，所以在培養(yǎng)基中無法存活。成功導(dǎo)入，但發(fā)生非同源重組的ES細胞中，HSK-tk基因可以表達，其產(chǎn)物會將培養(yǎng)基中的DHPG轉(zhuǎn)化為有毒物質(zhì)從而殺死ES細胞。只有發(fā)生同源重組的細胞，含有neo^r基因，同時無HSV-tk基因，可以在培養(yǎng)基中存活

。
（3）將嵌合體胚胎移植到受體小鼠并能在受體小鼠內(nèi)存活的原因是：

受體對外來胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)

受體對外來胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)

。