癌細胞表面蛋白“PDL-1”與T細胞表面蛋白“PD-1”特異性結合后，可抑制T細胞活性并啟動其凋亡，導致腫瘤細胞發(fā)生免疫“逃逸”。研究者對“PD-1”基因進行克隆、表達及生物學活性鑒定，為制備抗體打基礎。研究中所用引物α和β堿基序列見圖1、幾種常用限制酶名稱及識別序列與酶切位點見圖2：
（1）首先提取細胞中的mRNA反轉錄生成cDNAcDNA作為模板：設計含有不同的限制酶切點的α和β序列為引物，通過PCRPCR技術擴增目的基因。
（2）選用圖1中的兩種名稱分別為XhoI、EcoRIXhoI、EcoRI的限制酶將“pIRES2-EGFP質?！陛d體進行雙切，再用DNA連接酶將其與目的基因拼接，構建表達載體。該表達載體的組成，除了目的基因、標記基因抗卡那霉素基因外，還必須具有啟動子、終止子、復制原點啟動子、終止子、復制原點等
（3）而后一定溫度下，與經過Ca2+處理的感受態(tài)大腸桿菌混合培養(yǎng)在含有卡那霉素卡那霉素培養(yǎng)基中，可篩選出已經完成轉化的大腸桿菌，繼續(xù)培養(yǎng)該種大腸桿菌以擴增重組DNA。
（4）將擴增后的“pIRES2-EGFP載體/PD-1重組DNA”轉入可高度表達外源基因的原代293T細胞。一段時間后，為確定PD-1基因是否表達，檢測細胞膜表面是否具有PD-1蛋白PD-1蛋白。為判斷其是否具有生物學活性和功能，則可裂解293T細胞，提取該物質看能否與PDL-1或答ⅣD-1抗體PDL-1或答ⅣD-1抗體發(fā)生結合，從而阻斷“PD-1與PDL-1信號通路”。研究中還會有一步驟，只將“pIRES2-EGFP載體”轉入293T細胞，其目的是作為對照作為對照。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】cDNA；PCR；XhoI、EcoRI；啟動子、終止子、復制原點；卡那霉素；PD-1蛋白；PDL-1或答ⅣD-1抗體；作為對照
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：43引用：4難度：0.5
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1．下列有關基因工程技術和蛋白質工程技術敘述正確的是（ ?。?/h2>
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3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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