大腸桿菌pUC18質(zhì)粒是基因工程中常用的運(yùn)載體。某限制酶在此質(zhì)粒上的唯一酶切位點(diǎn)位于LacZ基因中，如果沒有插入外源基因，LacZ基因便可表達(dá)出口一半乳糖苷酶。當(dāng)培養(yǎng)基中含有IPTG和X-gal時，X-gal便會被β一半乳糖苷酶水解成藍(lán)色，大腸桿菌將形成藍(lán)色菌落。反之，則形成白色菌落。下圖表示利用此質(zhì)粒實施基因工程的主要流程。
請分析并回答：
（1）已獲得的目的基因可利用 PCRPCR技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增。
（2）目的基因插入質(zhì)粒構(gòu)建重組質(zhì)粒的過程中，需要DNA連接酶恢復(fù) 磷酸二酯磷酸二酯鍵。
（3）將試管I中的物質(zhì)和大腸桿菌共同置于試管Ⅱ的目的是 進(jìn)行轉(zhuǎn)化進(jìn)行轉(zhuǎn)化；大腸桿菌需事先用Ca2+進(jìn)行處理，目的是 使大腸桿菌細(xì)胞處于感受態(tài)使大腸桿菌細(xì)胞處于感受態(tài)。
（4）將試管Ⅱ中的菌液接種于選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)，培養(yǎng)基中應(yīng)含有大腸桿菌必需的營養(yǎng)物質(zhì)包括 碳源、氮源、無機(jī)鹽、水碳源、氮源、無機(jī)鹽、水和生長因子，還應(yīng)加入IPTG、X-gal以及氨芐青霉素，其中加入氨芐青霉素的作用是篩選出 導(dǎo)入pUC18質(zhì)粒的大腸桿菌導(dǎo)入pUC18質(zhì)粒的大腸桿菌。
（5）若觀察到培養(yǎng)基上出現(xiàn) 白白色菌落，則說明大腸桿菌中已成功導(dǎo)入了重組質(zhì)粒。如果作為受體細(xì)胞的大腸桿菌也含有LacZ基因，則不利于重組質(zhì)粒的篩選，原因是 無論大腸桿菌是否導(dǎo)入重組質(zhì)粒，均會呈現(xiàn)藍(lán)色菌落無論大腸桿菌是否導(dǎo)入重組質(zhì)粒，均會呈現(xiàn)藍(lán)色菌落。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合；微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)．
【答案】PCR；磷酸二酯；進(jìn)行轉(zhuǎn)化；使大腸桿菌細(xì)胞處于感受態(tài)；碳源、氮源、無機(jī)鹽、水；導(dǎo)入pUC18質(zhì)粒的大腸桿菌；白；無論大腸桿菌是否導(dǎo)入重組質(zhì)粒，均會呈現(xiàn)藍(lán)色菌落
【解答】
【點(diǎn)評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：77引用：11難度：0.5
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（2）為確保目的基因定向插入了質(zhì)粒，應(yīng)該選擇（填酶）切割目的基因和質(zhì)粒。在培養(yǎng)基中加入（填“氨芐青霉素”或“四環(huán)素”）對目的基因進(jìn)行篩選。
（3）培育轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種的核心工作是圖中過程（填序號）。過程②③采用的方法是。
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