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菁優(yōu)網M基因編碼的M蛋白在動物A的肝細胞中特異性表達?,F(xiàn)設計實驗,將外源DNA片段F插入M基因的特定位置,再通過特定生物學技術獲得M基因失活的轉基因克隆動物A,流程如圖所示?;卮鹣铝袉栴}:
(1)在構建含有片段F的重組質粒過程中,切割質粒DNA的工具酶能將特定部位的兩個核苷酸之間的
磷酸二酯鍵
磷酸二酯鍵
斷開。
(2)在無菌、無毒等適宜環(huán)境中進行動物A成纖維細胞的原代和傳代培養(yǎng)時,都要用到胰蛋白酶,作用分別是
將組織分散成細胞
將組織分散成細胞
使細胞從瓶壁上脫落
使細胞從瓶壁上脫落
。培養(yǎng)過程中,需要定期更換培養(yǎng)液,目的有
清除代謝物(,防止對細胞造成危害)
清除代謝物(,防止對細胞造成危害)
給細胞補充營養(yǎng)
給細胞補充營養(yǎng)
。
(3)與胚胎細胞核移植技術相比,體細胞核移植技術的成功率更低,原因是
體細胞分化程度高,恢復全能性困難
體細胞分化程度高,恢復全能性困難
。從早期胚胎中分離獲得的胚胎干細胞,功能上具有
全能性
全能性
。
(4)鑒定轉基因動物:以免疫小鼠的B淋巴細胞與骨髓瘤細胞進行融合,篩選融合雜種細胞,制備M蛋白的
單克隆抗體
單克隆抗體
。簡要寫出利用其確定克隆動物A中M基因是否失活的實驗思路:
分別提取動物A和克隆動物A的肝組織蛋白質,進行抗原——抗體雜交
分別提取動物A和克隆動物A的肝組織蛋白質,進行抗原——抗體雜交
。
(5)獲得克隆動物A時,除了轉基因技術,還涉及的生物學技術有
動物細胞培養(yǎng)、核移植、胚胎移植
動物細胞培養(yǎng)、核移植、胚胎移植

【答案】磷酸二酯鍵;將組織分散成細胞;使細胞從瓶壁上脫落;清除代謝物(,防止對細胞造成危害);給細胞補充營養(yǎng);體細胞分化程度高,恢復全能性困難;全能性;單克隆抗體;分別提取動物A和克隆動物A的肝組織蛋白質,進行抗原——抗體雜交;動物細胞培養(yǎng)、核移植、胚胎移植
【解答】
【點評】
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