鹽脅迫會(huì)影響植物的生長，可用轉(zhuǎn)基因技術(shù)提高植物的耐鹽能力。mybx是響應(yīng)鹽脅迫的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，其功能缺失突變體對(duì)150mmol?L^-1的NaCl高度敏感。HKT1基因表達(dá)的Na⁺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白介導(dǎo)Na⁺從木質(zhì)部導(dǎo)管到木質(zhì)部薄壁細(xì)胞的運(yùn)輸，減少木質(zhì)部的Na⁺含量，從而提高植物的耐鹽能力?？蒲腥藛T構(gòu)建HKT1基因的表達(dá)載體獲得HKT1基因表達(dá)菌體，構(gòu)建過程如圖所示。四種限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)如表所示?；卮鹣铝袉栴}：

限制酶	HindⅢ	BamHⅠ	XhoⅠ	BglⅡ
識(shí)別序列及切割位點(diǎn)	A↓AGCTT	G↓GATCC	C↓TCGAG	A↓GATCT

（1）將擬南芥細(xì)胞破碎提取RNA時(shí)，需要在溶液中加入

RNA酶抑制劑

RNA酶抑制劑

，以防止RNA降解。過程③要選擇合適的限制酶切割含HKT1基因的DNA片段，應(yīng)選用的表中的限制酶是

HindⅢ、XhoI

HindⅢ、XhoI

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（2）過程⑤將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌。在篩選含有HKT1基因的大腸桿菌時(shí)，除必要的營養(yǎng)物質(zhì)，還需要在培養(yǎng)基中添加

卡那霉素

卡那霉素

。提取重組質(zhì)粒A將其導(dǎo)入農(nóng)桿菌，用農(nóng)桿菌侵染擬南芥mybz突變體花序，農(nóng)桿菌的作用是

攜帶HKT1基因進(jìn)入擬南芥細(xì)胞，并使HKT1基因在細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)

攜帶HKT1基因進(jìn)入擬南芥細(xì)胞，并使HKT1基因在細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)

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（3）檢測(cè)轉(zhuǎn)HKT1基因擬南芥mybr突變株是否表達(dá)出Na⁺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白時(shí)，可用

抗原―抗體雜交

抗原―抗體雜交

技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。若Na⁺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白高度表達(dá)，還需要進(jìn)一步鑒定其抗性程度，實(shí)驗(yàn)的思路是

將轉(zhuǎn)基因突變株種植在施加了濃度為150mmol?L^-1的NaCl溶液的土壤中，檢測(cè)木質(zhì)部薄壁細(xì)胞的含鹽量和植株的生長狀況

將轉(zhuǎn)基因突變株種植在施加了濃度為150mmol?L^-1的NaCl溶液的土壤中，檢測(cè)木質(zhì)部薄壁細(xì)胞的含鹽量和植株的生長狀況

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