人乳鐵蛋白（hLF）對細菌、真菌和病毒等都有抑制作用。研究人員開展人乳鐵蛋白基因乳腺特異性表達載體構(gòu)建及轉(zhuǎn)染研究，主要流程如下圖。圖中AseⅠ、NheⅠ、SalⅠ、BamHⅠ代表相關(guān)限制酶切點，neo^r為新霉素抗性基因，BLG基因為B乳球蛋白基因，GFP基因為綠色熒光蛋白基因。請回答下列問題。

（1）過程①中，不能從人肌肉細胞中提取RNA用于RT-PCR，是因為

hLF基因在人肌肉細胞中不轉(zhuǎn)錄（表達）

hLF基因在人肌肉細胞中不轉(zhuǎn)錄（表達）

。熒光RT﹣PCR技術(shù)所用的試劑盒中通常都應(yīng)該含有

逆（反）轉(zhuǎn)錄酶

逆（反）轉(zhuǎn)錄酶

、Taq酶、熒光標(biāo)記的核酸探針、引物、dNTP、緩沖體系。
（2）在RT-PCR過程中，加入的引物需在

5'

5'

端添加

SalⅠ和BamHⅠ

SalⅠ和BamHⅠ

兩種限制酶的識別序列，便于hLF基因插入pEB中。利用RT-PCR技術(shù)獲取的目的基因

能

能

（填“能”或“不能”）在物種之間交流；該技術(shù)還可用于對某些微量RNA病毒的檢測，可提高檢測的靈敏度，原因是

增加了待測RNA逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的DNA的數(shù)量（或濃度），便于檢測

增加了待測RNA逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的DNA的數(shù)量（或濃度），便于檢測

。若利用PCR技術(shù)擴增某基因片段時消耗了126個引物分子，則該過程擴增了

6

6

次。
（3）過程②中，hLF基因插入到BLG基因之后的目的是

使人乳鐵蛋白基因在山羊的乳腺細胞中表達（或使目的基因表達）

使人乳鐵蛋白基因在山羊的乳腺細胞中表達（或使目的基因表達）

；該過程中，兩個基因共用的調(diào)控元件是BLG基因的

啟動子

啟動子

。
（4）PEBL質(zhì)粒導(dǎo)入受體細胞的方法是

脂質(zhì)體介導(dǎo)

脂質(zhì)體介導(dǎo)

，依據(jù)的主要原理是

生物膜具有一定的流動性

生物膜具有一定的流動性

。
（5）將轉(zhuǎn)染后的山羊乳腺上皮細胞先置于含新霉素的培養(yǎng)液中培養(yǎng)，再利用熒光顯微鏡觀察山羊乳腺上皮細胞中

是否有綠色熒光

是否有綠色熒光

，以篩選出轉(zhuǎn)染成功的細胞。該過程

不能

不能

（填“能”或“不能”）區(qū)分普通質(zhì)?；蛑亟M質(zhì)粒，接下來還可采用

分子雜交

分子雜交

技術(shù)檢驗基因是否成功轉(zhuǎn)錄。