小立碗蘚是具有高效同源重組率的苔蘚植物,科學(xué)家利用同源重組交換的原理對小立碗蘚進(jìn)行基因敲除來研究某目的基因的功能?;蚯贸^程是先構(gòu)建基因敲除載體,將基因敲除載體導(dǎo)入受體細(xì)胞,經(jīng)過篩選找出基因敲除成功的植株?;蚯贸砣鐖D所示:
注:抗生素抗性基因表達(dá)產(chǎn)物對卡那霉素有抗性;1、2為實現(xiàn)同源重組交換的序列,3、4、5、6為其他不同的基因片段;G-up-f、G-down-r、35sp-r、35st-f、Gene-f、Gene-r為引物;1、2序列發(fā)生同源重組,使得野生型小立碗蘚DNA上的目的基因被抗生素抗性基因替換。
(1)小立碗蘚目的基因敲除載體的受體細(xì)胞是原生質(zhì)體。要制備小立碗蘚的原生質(zhì)體,常用的酶是 纖維素酶和果膠酶纖維素酶和果膠酶。制備原生質(zhì)體時,兩種酶應(yīng)該溶解在 等于等于(填“大于”“小于”或“等于”)細(xì)胞液濃度的外界溶液中,原因是 若濃度過低原生質(zhì)體會吸水漲破,若濃度過高則會失水皺縮若濃度過低原生質(zhì)體會吸水漲破,若濃度過高則會失水皺縮。將構(gòu)建好的目的基因敲除載體導(dǎo)入原生質(zhì)體,然后將原生質(zhì)體放在含 卡那霉素卡那霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng),對能存活的植物提取基因組DNA,用引物 Gene-f、Gene-rGene-f、Gene-r進(jìn)行PCR擴增30個循環(huán)后進(jìn)行電泳,如果沒有目的基因條帶,則確定目的基因敲除成功。
(2)若1,2序列特異性差,則目的基因敲除載體可能會與非目的基因序列發(fā)生同源重組,造成目的基因敲除失敗。若用G-up-f、G-down-r進(jìn)行擴增,不能不能(填“能”或“不能”)確定野生型小立碗蘚DNA上的目的基因是否被抗生素抗性基因替換,原因是 無論野生型小立碗蘚DNA上的目的基因是否被抗生素抗性基因替換,擴增的結(jié)果都有條帶無論野生型小立碗蘚DNA上的目的基因是否被抗生素抗性基因替換,擴增的結(jié)果都有條帶。
(3)動物減數(shù)分裂過程中,可能發(fā)生類似上述抗生素抗性基因替換目的基因的過程,具體時期是在 減數(shù)分裂Ⅰ前期(或四分體時期)減數(shù)分裂Ⅰ前期(或四分體時期)。
【考點】DNA片段的擴增與電泳鑒定;基因工程的操作過程綜合.
【答案】纖維素酶和果膠酶;等于;若濃度過低原生質(zhì)體會吸水漲破,若濃度過高則會失水皺縮;卡那霉素;Gene-f、Gene-r;不能;無論野生型小立碗蘚DNA上的目的基因是否被抗生素抗性基因替換,擴增的結(jié)果都有條帶;減數(shù)分裂Ⅰ前期(或四分體時期)
【解答】
【點評】
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發(fā)布:2024/4/20 14:35:0組卷:8引用:1難度:0.6
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限制酶 BclⅠ NotⅠ XbaⅠ San3AⅠ 識別序列及切割位點 T↓GATCA GC↓GGCCGC T↓CTAGA ↓GATC
a 5'-GCTCTAGAATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC
b 5'-GTTGCGGCCGCTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC
c 5'-GCGATCATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC
d 5'-GTTTGATCACTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC
(2)過程②將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌的目的是
(3)若用Sau3AⅠ和XbaⅠ完全酶切質(zhì)粒C后電泳,請在答題紙相應(yīng)位置畫出可能得到的電泳條帶。
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