農(nóng)桿菌是一種在土壤中生活的微生物，能在自然條件下侵染雙子葉植物和裸子植物，而對大多數(shù)單子葉植物沒有侵染能力。植物基因工程中常用含有重組Ti質(zhì)粒的農(nóng)桿菌和受體植物細(xì)胞的愈傷組織共培養(yǎng)，進(jìn)行轉(zhuǎn)基因操作。現(xiàn)有一段抗除草劑基因編碼蛋白質(zhì)的區(qū)域在克隆載體上，要將其轉(zhuǎn)入棉花細(xì)胞，得到抗除草劑的轉(zhuǎn)基因棉花。
（1）在構(gòu)建基因表達(dá)載體的過程中，要先用 限制酶限制酶對 目的基因目的基因和 運(yùn)載體運(yùn)載體進(jìn)行切割，之后用 DNA連接DNA連接酶連接形成重組質(zhì)粒。該過程中為保證目的基因以正確的方向與Ti質(zhì)粒進(jìn)行連接，科學(xué)家使用 22（填“1”或“2”）種限制酶。
（2）在以上重組質(zhì)粒中，目的基因和抗卡那霉素抗性基因，都應(yīng)該位于 T-DNAT-DNA片段內(nèi)，因?yàn)?Ti質(zhì)粒上只有T-DNA片段能夠整合到受體細(xì)胞的染色體DNA上Ti質(zhì)粒上只有T-DNA片段能夠整合到受體細(xì)胞的染色體DNA上。
（3）將重組的Ti質(zhì)粒轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌可用 Ca2+Ca2+處理。得到的農(nóng)桿菌菌液和棉花細(xì)胞愈傷組織共培養(yǎng)一段時(shí)間后，將愈傷組織置于含有 卡那霉素卡那霉素和除草劑的選擇培養(yǎng)基上進(jìn)行組織培養(yǎng)，通過調(diào)整 生長素和細(xì)胞分裂素的比例生長素和細(xì)胞分裂素的比例，使其脫分化、再分化形成轉(zhuǎn)基因植株群體。
（4）除上述方法獲得抗除草劑的棉花，用物理或化學(xué)方法對大量正常棉花的 愈傷組織愈傷組織進(jìn)行誘變處理，最終發(fā)現(xiàn)僅一株煙草（P）抗除草劑但同時(shí)花粉敗育。為保留抗除草劑特性，最快能在 F1F1（填“F1”或“F2”）中能獲得抗除草劑純合子植株。
【考點(diǎn)】植物的組織培養(yǎng)．
【答案】限制酶；目的基因；運(yùn)載體；DNA連接；2；T-DNA；Ti質(zhì)粒上只有T-DNA片段能夠整合到受體細(xì)胞的染色體DNA上；Ca2+；卡那霉素；生長素和細(xì)胞分裂素的比例；愈傷組織；F1
【解答】
【點(diǎn)評】
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