[選修3：現(xiàn)代生物科技專題]
TaqMan探針法qPCR是使用TaqMan熒光探針進(jìn)行熒光檢測(cè)的方法，其基本原理是PCR擴(kuò)增時(shí)在加入引物的同時(shí)加入特異性的熒光探針，該探針兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。開始時(shí)，探針完整地結(jié)合在DNA任意一條單鏈上，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收，檢測(cè)不到熒光信號(hào)；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5′-3′核酸外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而發(fā)出熒光，切割的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比，因此，通過檢測(cè)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度可以達(dá)到檢測(cè)PCR產(chǎn)物擴(kuò)增量的目的。下面是TaqMan水解探針作用機(jī)理示意圖。請(qǐng)回答下列問題：
（1）PCR的原理是

DNA雙鏈復(fù)制

DNA雙鏈復(fù)制

。在反應(yīng)體系中除模板外還需要添加的物質(zhì)有

引物熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）和dNTP

引物熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）和dNTP

，如果想要獲得100個(gè)目的基因，在反應(yīng)體系中加入2分子底物DNA的情況下，至少需要經(jīng)過

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次PCR過程。
（2）從解旋過程進(jìn)行分析，PCR擴(kuò)增與體內(nèi)DNA復(fù)制過程不相同的地方是

PCR擴(kuò)增是完全解旋后進(jìn)行復(fù)制，在高溫條件下解旋，不需要解旋酶，而體內(nèi)DNA復(fù)制是邊解旋邊復(fù)制，需要解旋酶解旋

PCR擴(kuò)增是完全解旋后進(jìn)行復(fù)制，在高溫條件下解旋，不需要解旋酶，而體內(nèi)DNA復(fù)制是邊解旋邊復(fù)制，需要解旋酶解旋

（答出兩點(diǎn)）。
（3）對(duì)新冠疑似患者進(jìn)行核酸檢測(cè)是目前最常用的檢測(cè)手段，獲得鼻拭子、咽拭子后，首先通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因片段，然后采用相應(yīng)的DNA分子探針進(jìn)行檢測(cè)。此處的分子探針是

可以與新冠病毒核酸配對(duì)的單鏈DNA片段

可以與新冠病毒核酸配對(duì)的單鏈DNA片段

，檢測(cè)原理是

堿基互補(bǔ)配對(duì)原則

堿基互補(bǔ)配對(duì)原則

。
（4）研究人員采用PCR技術(shù)可以獲得大量目的基因，此外，獲得目的基因的方法還有

通過DNA合成儀用化學(xué)方法直接人工合成、從基因文庫中獲取

通過DNA合成儀用化學(xué)方法直接人工合成、從基因文庫中獲取

（答出兩種）。
（5）PCR過程中Taq酶從5′端切斷TaqMan探針，釋放熒光基團(tuán)。根據(jù)熒光強(qiáng)度可對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行定量分析，原理是

PCR擴(kuò)增時(shí)，切割的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比

PCR擴(kuò)增時(shí)，切割的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比

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