現(xiàn)代生物技術(shù)。
吡哆醛激酶（PLK）是維生素B₆的關(guān)鍵代謝酶，某研究團(tuán)隊(duì)構(gòu)建了含家蠶PLK基因的重組質(zhì)粒，導(dǎo)入大腸桿菌誘導(dǎo)表達(dá)，對(duì)所得的產(chǎn)物進(jìn)行分離純化。
重組質(zhì)粒的構(gòu)建選用了pET-22b（+）質(zhì)粒，圖1為該質(zhì)粒一條鏈的部分序列。各限制酶的識(shí)別序列、DNA序列所對(duì)應(yīng)的氨基酸序列均已在圖中標(biāo)注。

（1）DNA分子中與mRNA序列一致的鏈稱(chēng)為編碼鏈，與mRNA序列互補(bǔ)的鏈稱(chēng)為模板鏈。氨基酸Met的密碼子是AUG，由此可知圖1所示為

編碼鏈

編碼鏈

（編碼鏈/模板鏈）。
（2）該團(tuán)隊(duì)將家蠶PLK基因作為目的基因（圖2），兩端的序列已于圖中標(biāo)注。為了將圖2所示目的基因插入圖1所示的質(zhì)粒序列，應(yīng)選用的限制酶是

B

B

。
A.NdeⅠ和HindⅢ
B.NdeⅠ和XhoⅠ
C.SalⅠ和HindⅢ
D.SalⅠ和XhoⅠ
（3）pET-22b（+）質(zhì)粒含有氨芐青霉素的抗性基因，該質(zhì)粒的pelB leader序列可將表達(dá)的目的蛋白分泌到細(xì)胞外。若按照第（2）題所選的限制酶進(jìn)行預(yù)定操作，下列分析正確的是

BD

BD

。（多選）
A.應(yīng)選用具有氨芐青霉素抗性的大腸桿菌作為受體菌
B.應(yīng)選用不具有氨芐青霉素抗性的大腸桿菌作為受體菌
C.大腸桿菌所表達(dá)的目的蛋白會(huì)被分泌到細(xì)胞外
D.大腸桿菌所表達(dá)的目的蛋白不會(huì)被分泌到細(xì)胞外
（4）通過(guò)上述方法在大腸桿菌中表達(dá)出的吡哆醛激酶，其肽鏈在羧基端有連續(xù)6個(gè)氨基酸His（His?Tag），可利用His?Tag與Ni²⁺之間的親和層析加以純化。此步操作應(yīng)于何時(shí)進(jìn)行

C

C

。
A.破碎細(xì)菌后，過(guò)濾前
B.過(guò)濾后，加入硫酸銨前
C.加入硫酸銨后，冷凍結(jié)晶前
D.冷凍結(jié)晶后
（5）若以上述工藝流程大規(guī)模生產(chǎn)吡哆醛激酶，涉及生物工程的領(lǐng)域有

ACD

ACD

。（多選）
A.基因工程
B.細(xì)胞工程
C.發(fā)酵工程
D.酶工程