M基因編碼的M蛋白在動物A的肝細胞中特異性表達?，F(xiàn)設計實驗，將外源DNA片段F插入M基因的特定位置，再通過核移植、胚胎培養(yǎng)和胚胎移植等技術獲得M基因失活的轉基因克隆動物A，流程如圖所示?；卮鹣铝袉栴}：
（1）在構建含有片段F的重組質粒過程中，將目的基因和質?！翱p合”在一起的工具酶是

DNA連接酶

DNA連接酶

。該酶據(jù)來源可以分為兩類，其中

T₄DNA連接酶

T₄DNA連接酶

既可以“縫合”粘性末端，又可以“縫合”平末端。將重組質粒導入成纖維細胞常用的方法是

顯微注射技術

顯微注射技術

。
（2）動物細胞培養(yǎng)液中通常需要添加一定量的

抗生素

抗生素

，以防止培養(yǎng)過程中的污染。在無菌、無毒等適宜環(huán)境中進行動物A成纖維細胞的原代和傳代培養(yǎng)時，需要定期更換培養(yǎng)液，目的是

清除代謝產(chǎn)物，防止細胞代謝產(chǎn)物積累對細胞自身造成危害

清除代謝產(chǎn)物，防止細胞代謝產(chǎn)物積累對細胞自身造成危害

。
（3）與胚胎細胞核移植技術相比，體細胞核移植技術的成功率更低，原因是

動物胚胎細胞分化程度低，恢復其全能性相對容易，而動物體細胞分化程度高，恢復其全能性十分困難

動物胚胎細胞分化程度低，恢復其全能性相對容易，而動物體細胞分化程度高，恢復其全能性十分困難

。從早期胚胎中分離獲得的胚胎干細胞，在形態(tài)上表現(xiàn)為

細胞體積小，細胞核大，核仁明顯

細胞體積小，細胞核大，核仁明顯

（答出兩點即可），功能上具有

發(fā)育的全能性

發(fā)育的全能性

。
（4）鑒定轉基因動物：以免疫小鼠的

B

B

淋巴細胞與骨髓瘤細胞進行融合，篩選融合雜種細胞，制備M蛋白的單克隆抗體。