某研究小組計劃通過多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）擴(kuò)增目的基因并用于構(gòu)建轉(zhuǎn)基因工程菌，其擴(kuò)增過程示意圖如下?；卮鹣铝袉栴}：
（1）圖中“？”代表的溫度約為 5050℃。步驟1的目的是 使模板DNA的雙鏈解聚使模板DNA的雙鏈解聚。
（2）PCR過程中需要使用的酶是 耐高溫的DNA聚合酶耐高溫的DNA聚合酶，和人體內(nèi)同種功能的酶相比，該酶的顯著特點是 可以在高溫條件下正常發(fā)揮酶的催化作用可以在高溫條件下正常發(fā)揮酶的催化作用。
（3）設(shè)計一對與MT基因兩端序列互補配對的引物（引物1和引物2），設(shè)計引物時需要避免引物之間形成 氫鍵氫鍵，而造成引物自連。若將一個目的基因通過PCR過程共進(jìn)行5輪循環(huán)，則有 3131條DNA單鏈含引物1（或引物2）。
（4）PCR擴(kuò)增時，復(fù)性溫度的設(shè)定是成敗的關(guān)鍵。復(fù)性溫度過高會破壞 引物與模板引物與模板的堿基配對。復(fù)性溫度的設(shè)定與引物長度、堿基組成有關(guān)，長度相同但 G、CG、C堿基含量高的引物需要設(shè)定相對更高的復(fù)性溫度。
【考點】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定．
【答案】50；使模板DNA的雙鏈解聚；耐高溫的DNA聚合酶；可以在高溫條件下正常發(fā)揮酶的催化作用；氫鍵；31；引物與模板；G、C
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：2引用：3難度：0.6
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1．數(shù)字PCR技術(shù)是一種核酸分子絕對定量技術(shù)，其原理如圖所示。下列有關(guān)敘述正確的是（ ?。?img alt="菁優(yōu)網(wǎng)" src="http://img.jyeoo.net/quiz/images/202204/49/6d911ea3.png" style="vertical-align:middle" />
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：6引用：2難度：0.6 -
2．PCR技術(shù)不僅可以擴(kuò)增目的基因，還可用于定點誘變目的基因等。大引物PCR就是一種定點突變技術(shù)。大引物PCR需要用到引物進(jìn)行兩次PCR，其操作步驟為：
①根據(jù)目的基因序列設(shè)計引物，得到兩個常規(guī)引物，分別為常規(guī)上游引物和常規(guī)下游引物；
②根據(jù)突變堿基所處序列位置設(shè)計突變上游引物，突變位點位于突變引物序列的中間位置
③由突變上游引物與常規(guī)下游引物進(jìn)行第一次PCR反應(yīng)得到下游大引物；
④用得到的下游大引物中和另一個常規(guī)上游引物進(jìn)行第二次PCR擴(kuò)增，得到突變目的基因序列。回答下列問題：
（1）PCR擴(kuò)增的第一步是使雙鏈模板DNA變性。DNA中G+C的含量與變性要求的溫度有關(guān)，DNA中G+C的含量越多，要求的變性溫度越高。其原因是。該PCR擴(kuò)增技術(shù)所需的基本條件是種引物、原料、模板、。
（2）在第一次PCR反應(yīng)中，形成圖示雙鏈DNA至少要經(jīng)過次復(fù)制。第一次PCR的產(chǎn)物DNA的條鏈作為第二次PCR所用的引物。與X射線誘變相比，該突變技術(shù)的優(yōu)點是。
（3）如果要利用微生物進(jìn)一步克隆PCR定點誘變產(chǎn)物，其步驟包括：、、微生物的篩選和培養(yǎng)、從菌群中獲取更多目的基因。將獲取目的基因和質(zhì)粒進(jìn)行連接后，需先用處理農(nóng)桿菌以便將基因表達(dá)載體導(dǎo)入馬鈴薯細(xì)胞，將馬鈴薯細(xì)胞培養(yǎng)成幼苗時經(jīng)過的兩個過程是。檢測目的基因是否在馬鈴薯細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄出了mRNA，所采用的方法是。發(fā)布：2024/12/30 23:0:2組卷：32引用：3難度：0.6 -
3．下列關(guān)于DNA片段擴(kuò)增及其鑒定的說法錯誤的是（ ）
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：3引用：3難度：0.7
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