研究表明，服用α-干擾素在慢性乙肝、丙肝及部分腫瘤的治療中有一定療效。人參是一種名貴藥材，具有較好的滋補作用。限制酶的發(fā)現(xiàn)為DNA的切割和功能基因的獲得創(chuàng)造了條件。限制酶Sau3AⅠ、EcoRⅠ、BamHⅠ的識別序列及切割位點分別為↓GATC、G↓AATTC、C↓GATCC。含干擾素基因的DNA片段如圖1所示，圖2為科研人員制備能合成干擾素的人參愈傷組織細胞的流程圖，①～④表示相關的操作。請回答下列問題：
（1）結合上圖，在構建基因表達載體時，為克服目的基因和農桿菌Ti質粒的自身環(huán)化以及目的基因與質粒的任意連接等，應選擇用限制酶 EcoRⅠ和BamHⅠEcoRⅠ和BamHⅠ處理含某目的基因的DNA和質粒。
（2）DNA連接酶催化目的基因片段與質粒載體片段之間形成的化學鍵是 磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵。
（3）圖2操作①常利用PCR技術獲取和擴增干擾素基因，除含有干擾素基因的DNA片段之外，該過程需要提供 4種脫氧核苷酸和耐高溫的DNA聚合酶（dNTP和Taq酶）4種脫氧核苷酸和耐高溫的DNA聚合酶（dNTP和Taq酶）以及與干擾素基因兩端兩條模板鏈結合的兩種引物。設計引物時，為了保證目的基因與質粒順利連接，防止出現(xiàn)自身環(huán)化連接，需要在兩種引物的一端分別加上EcoRⅠ和BamHⅠ的識別序列 GAATTC和CGATCCGAATTC和CGATCC。
（4）圖2步驟②除EcoRⅠ、BamHⅠ兩種酶外，還需要用 DNA連接DNA連接酶。構建的基因表達載體除含有目的基因片段以外，還必須有 啟動子和終止子啟動子和終止子，以保證干擾素基因能在人參愈傷組織細胞中穩(wěn)定存在和表達。同時，還應含有標記基因以便于 篩選含有重組DNA分子的受體細胞篩選含有重組DNA分子的受體細胞。
（5）圖2操作④常用 抗原—抗體雜交抗原—抗體雜交技術檢測干擾素基因是否成功表達出干擾素。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】EcoRⅠ和BamHⅠ；磷酸二酯鍵；4種脫氧核苷酸和耐高溫的DNA聚合酶（dNTP和Taq酶）；GAATTC和CGATCC；DNA連接；啟動子和終止子；篩選含有重組DNA分子的受體細胞；抗原—抗體雜交
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/8/6 8:0:9組卷：28引用：3難度：0.5
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6