乳鐵蛋白（lactoferrin,LF）是乳汁中一種重要的非血紅素鐵結(jié)合糖蛋白，具有廣譜抗菌、抗氧化、抗癌、調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)等強(qiáng)大生物功能，被認(rèn)為是一種新型抗菌、抗癌藥物。如圖是研究人員開展人乳鐵蛋白（hLF）基因乳腺特異性表達(dá)載體構(gòu)建及轉(zhuǎn)化研究，已知只有將過程①獲得的hLF基因置于BLG基因調(diào)控區(qū)下游，才能使其在動物乳腺的組織中特異性表達(dá)。請回答下列問題：

（1）過程①中為了獲取大量hLF基因，需要反轉(zhuǎn)錄后進(jìn)行PCR擴(kuò)增（RT-PCR），PCR時需要在引物的

5'

5'

（填“3'”或“5'”）端添加相應(yīng)的酶切位點(diǎn)，以便構(gòu)建pEBL質(zhì)粒。經(jīng)過4輪循環(huán)后，得到的子代DNA分子中，不同時含有兩種引物的DNA分子占

1

8

1

8

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（2）通過過程①獲取的hLF基因需要插入到BLG基因之后最可能的原因是

BLG基因含有啟動子能啟動hLF基因在動物乳腺組織中特異性表達(dá)

BLG基因含有啟動子能啟動hLF基因在動物乳腺組織中特異性表達(dá)

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（3）要在含pEBL質(zhì)粒、含pEB質(zhì)粒和不含質(zhì)粒的山羊乳腺上皮細(xì)胞中篩選出含pEBL質(zhì)粒的山羊乳腺上皮細(xì)胞，請寫出簡要的思路

先將被篩選的山羊乳腺上皮細(xì)胞置于含新霉素的培養(yǎng)液中培養(yǎng)一段時間，再利用熒光顯微鏡觀察山羊乳腺上皮細(xì)胞，沒有綠色熒光的活細(xì)胞即是含pEBL質(zhì)粒的山羊乳腺上皮細(xì)胞

先將被篩選的山羊乳腺上皮細(xì)胞置于含新霉素的培養(yǎng)液中培養(yǎng)一段時間，再利用熒光顯微鏡觀察山羊乳腺上皮細(xì)胞，沒有綠色熒光的活細(xì)胞即是含pEBL質(zhì)粒的山羊乳腺上皮細(xì)胞

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（4）要獲得轉(zhuǎn)基因山羊，還需要將成功表達(dá)hLF的乳腺上皮細(xì)胞的細(xì)胞核移植到山羊的

去核的卵母細(xì)胞

去核的卵母細(xì)胞

中，再借助早期胚胎培養(yǎng)和胚胎移植技術(shù)孕育出羊羔。胚胎移植程序中要對供、受體母畜進(jìn)行同期發(fā)情處理，目的是

使供、受體生殖器官的生理變化相同，為供體的胚胎移植入受體提供相同的生理環(huán)境

使供、受體生殖器官的生理變化相同，為供體的胚胎移植入受體提供相同的生理環(huán)境

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