人感染乳頭瘤病毒（HPV）可誘發(fā)宮頸癌等惡性腫瘤，人乳頭瘤病毒疫苗可以預(yù)防由HPV引起的多種宮頸癌，是世界上第一個(gè)預(yù)防癌癥的疫苗。圖a是HPV疫苗制備所需的L₁基因片段，圖b是某種質(zhì)粒載體。

回答下列問題：
（1）基因工程的核心步驟是

基因表達(dá)載體的構(gòu)建

基因表達(dá)載體的構(gòu)建

，為構(gòu)建重組HPV疫苗，科研人員將L₁基因插入質(zhì)粒中，最好選擇限制酶

BamHI、HindⅢ

BamHI、HindⅢ

進(jìn)行共同切割，原因是

不會(huì)導(dǎo)致標(biāo)記基因都被破壞/避免目的基因自身環(huán)化/避免載體自身環(huán)化/避免目的基因反向連接到載體上/BdI在質(zhì)粒上的酶切位點(diǎn)不唯一，導(dǎo)致結(jié)果不可控

不會(huì)導(dǎo)致標(biāo)記基因都被破壞/避免目的基因自身環(huán)化/避免載體自身環(huán)化/避免目的基因反向連接到載體上/BdI在質(zhì)粒上的酶切位點(diǎn)不唯一，導(dǎo)致結(jié)果不可控

（答出2點(diǎn)即可）。
（2）圖中啟動(dòng)子為

RNA聚合酶

RNA聚合酶

結(jié)合位點(diǎn)，該處序列應(yīng)根據(jù)

大腸桿菌

大腸桿菌

（填“人宮頸細(xì)胞”或“乳頭瘤病毒”或“大腸桿菌”）的RNA聚合酶識別序列來設(shè)計(jì)。
（3）若將工具酶處理目的基因和質(zhì)粒載體得到的混合物經(jīng)過連接后轉(zhuǎn)化大腸桿菌，常用

Ca²⁺

Ca²⁺

處理大腸桿菌，使其處于一種

能吸收周圍環(huán)境中DNA分子

能吸收周圍環(huán)境中DNA分子

的狀態(tài)。結(jié)果得到三種大腸桿菌：①未被轉(zhuǎn)化②含有質(zhì)粒載體③含帶有目的基因的重組質(zhì)粒。如果用含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，在上述三種大腸桿菌中，能夠正常生長的有

②③

②③

（填序號）﹔若將上述篩選出來的大腸桿菌，培養(yǎng)在含有卡那霉素的固體培養(yǎng)基上，能生長的是

②

②

（填序號）。
（4）若要檢測大腸桿菌是否產(chǎn)生了HPV疫苗，需要用

抗原-抗體雜交

抗原-抗體雜交

技術(shù)檢測。與傳統(tǒng)滅活疫苗相比，這樣的重組疫苗更安全又有效。從疫苗的組成成分分析，其主要原因是該疫苗不含

核酸

核酸

，所以無侵染能力。