干擾素在臨床上被廣泛用于治療病毒感染性疾病及多種癌癥,傳統(tǒng)生產(chǎn)干擾素的方法是從人體的白細胞內(nèi)提取,產(chǎn)量極低。1993年,我國批推生產(chǎn)由侯云德院士研究和開發(fā)的藥物重組人干擾素α-1b,它是我國第一個具有自主知識產(chǎn)權(quán)的基因工程藥物,通過轉(zhuǎn)基因的大腸桿菌來生產(chǎn),產(chǎn)量得到大幅度的提高。請回答下列問題:
(1)從人體臍帶血白細胞中提取mRNA,通過 逆轉(zhuǎn)錄逆轉(zhuǎn)錄的方法合成DNA,再通過PCR技術(shù)擴增獲取干擾素基因,擴增的特異性與 引物引物有關(guān)。
(2)若將重組人干擾素α-1b基因直接導入大腸桿菌細胞,一般不能得到重組干擾素α-1b,原因是 人干擾素α-1b基因在大腸桿菌中不能穩(wěn)定存在和復制,也不能表達和發(fā)揮作用人干擾素α-1b基因在大腸桿菌中不能穩(wěn)定存在和復制,也不能表達和發(fā)揮作用。因此,需將重組人干擾素α-1b基因、啟動子、終止子啟動子、終止子、標記基因和質(zhì)粒構(gòu)建成基因表達載體導入大腸桿菌。
(3)篩選出具有重組干擾素α-1b基因的大腸桿菌應使用 選擇選擇培養(yǎng)基。為檢測干擾素基因是否成功表達,分子水平上可以采用 抗原—抗體雜交抗原—抗體雜交的方法進行檢測。
(4)通過蛋白質(zhì)工程對α-1b基因直接改造,實現(xiàn)了將α-1b第86位上的半胱氨酸變成絲氨酸,解決α-1b在水溶液中難以長期保存的難題。改造α-1b時直接對α-1b基因改造的原因是 對基因進行改造比對蛋白質(zhì)直接改造要容易操作,難度要小得多;對基因改造的結(jié)果可以遺傳對基因進行改造比對蛋白質(zhì)直接改造要容易操作,難度要小得多;對基因改造的結(jié)果可以遺傳。
【答案】逆轉(zhuǎn)錄;引物;人干擾素α-1b基因在大腸桿菌中不能穩(wěn)定存在和復制,也不能表達和發(fā)揮作用;啟動子、終止子;選擇;抗原—抗體雜交;對基因進行改造比對蛋白質(zhì)直接改造要容易操作,難度要小得多;對基因改造的結(jié)果可以遺傳
【解答】
【點評】
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