2022年1月7日，美國馬里蘭州的醫(yī)生首次將基因編輯豬的心臟移植到人類患者身上。如果異種移植可以實現(xiàn)，將可明顯緩解器官緊缺的問題。然而心臟移植過程中會發(fā)生缺血再灌注損傷（IRI），可能導(dǎo)致心臟壞死。研究發(fā)現(xiàn)，IRI通過促進Caspase 8等一系列凋亡基因的表達，導(dǎo)致細胞凋亡最終引起器官損傷。根據(jù)Caspase 8基因合成的小干擾RNA（siRNA）可以使Caspase 8基因沉默，有效抑制IRI所致的器官損傷。圖1是利用豬的心肌細胞開展siRNA作用研究的示意圖，圖2是此研究可能用到的4種限制酶及其切割位點，回答下列問題：
   （1）圖中步驟②構(gòu)建重組質(zhì)粒需要使用

限制酶、DNA連接酶

限制酶、DNA連接酶

等工具酶。DNA連接酶催化目的基因片段與質(zhì)粒載體片段之間形成的化學(xué)鍵是

磷酸二酯鍵

磷酸二酯鍵

。
（2）與直接將siRNA導(dǎo)入豬的心肌細胞相比，通過重組質(zhì)粒將siRNA對應(yīng)的DNA序列導(dǎo)入心肌細胞的優(yōu)點是

可持續(xù)產(chǎn)生siRNA，使靶基因長時間沉默

可持續(xù)產(chǎn)生siRNA，使靶基因長時間沉默

（答出一點）。導(dǎo)入過程最常用的方法是

顯微注射法

顯微注射法

，
（3）研究人員根據(jù)Caspase 8基因的堿基序列，設(shè)計了三種序列分別導(dǎo)入豬的心肌細胞，通過測定靶基因Caspase 8的mRNA含量來確定最優(yōu)序列。測定mRNA含量時，需提取心肌細胞的總RNA，經(jīng)過

逆轉(zhuǎn)錄

逆轉(zhuǎn)錄

過程得到cDNA，再進行PCR擴增，測定PCR產(chǎn)物量，結(jié)果如圖3所示，據(jù)此判斷最優(yōu)序列是

序列2

序列2

。
（4）將豬心臟移植到人體面臨的最大挑戰(zhàn)是免疫排斥反應(yīng)，這是因為免疫系統(tǒng)會把外來器官當(dāng)作抗原（“非己”）成分進行攻擊。請說出一種解決這一問題的思路：

可以利用基因工程技術(shù)將免疫排斥有關(guān)豬的抗原基因敲除或轉(zhuǎn)入一些人類特有蛋白的基因，將豬細胞偽裝成人的細胞

可以利用基因工程技術(shù)將免疫排斥有關(guān)豬的抗原基因敲除或轉(zhuǎn)入一些人類特有蛋白的基因，將豬細胞偽裝成人的細胞

（利用基因工程的方法）。異體移植易出現(xiàn)免疫排斥，但胚胎移植卻能夠在受體子宮內(nèi)存活，胚胎移植能夠在受體內(nèi)存活的前提條件是

受體對移入子宮的外來胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)

受體對移入子宮的外來胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)

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