四尾柵藻是一種淡水藻類，繁殖快、適應(yīng)性強，可作為制備生物柴油的重要原料之一。為提高四尾柵藻油脂含量，研究人員將從含油量高的紫蘇中獲得的二酰甘油?；D(zhuǎn)移酶基因（DGAT1）與pBI121質(zhì)粒構(gòu)建表達載體，經(jīng)轉(zhuǎn)化成功獲得高產(chǎn)油脂四尾柵藻，主要研究過程如圖，其中DGAT1-F（5'-GCATCTAGAATGGCGATCTTGGACTC-3'）和DGAT1-R（5'-CGGATCCCTACCTTGCACTAGCTTTTC-3'）是以DGAT1基因為依據(jù)設(shè)計的一對引物，1acZ基因編碼產(chǎn)物在X-ga1和IPTG存在下，可以產(chǎn)生藍色沉淀，使菌落呈現(xiàn)藍色，否則菌落呈現(xiàn)白色。請回答下列問題。
?
| 限制酶識別序列及切割位點 | |
| BamHⅠ | 5′G↓GATCC3′ |
| SacⅠ | 5′GAGCT↓C3′ |
| XbaⅠ | 5′T↓CTAGA3′ |
| EcoRⅠ | 5′G↓AATTC3′ |
逆轉(zhuǎn)錄酶、耐高溫的DNA聚合酶
逆轉(zhuǎn)錄酶、耐高溫的DNA聚合酶
，過程②應(yīng)選用的限制酶是 BamHⅠ
BamHⅠ
和 XbaⅠ
XbaⅠ
。（2）研究中，在保存DGAT1基因時，將克隆載體導(dǎo)入大腸桿菌的優(yōu)點有
①②④
①②④
。①穩(wěn)定保存
②準確復(fù)制
③快速表達
④方便取用
（3）過程③經(jīng)轉(zhuǎn)化的大腸桿菌通過
稀釋涂布平板法
稀釋涂布平板法
（方法）接種到培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)。為篩選獲得目標菌株，培養(yǎng)基應(yīng)加入的成分有 氨芐青霉素、X-gal、IPTG
氨芐青霉素、X-gal、IPTG
。（4）為檢測表達載體轉(zhuǎn)化四尾柵藻的情況及確定目的基因是否表達，研究人員進行了如下實驗，請完成表。
| 實驗步驟 | 簡要操作過程 |
| 初篩培養(yǎng) | 經(jīng)轉(zhuǎn)化后的四尾柵藻接種于含① 卡那霉素 卡那霉素 的BG11固體培養(yǎng)基并放置于人工氣候箱培養(yǎng)，一段時間后觀察其生長情況 |
| ② 擴大培養(yǎng) 擴大培養(yǎng) |
在BG11固體培養(yǎng)基上分別挑取數(shù)個單藻落接種至BG11液體培養(yǎng)基中光照搖床培養(yǎng)，編號備用 |
| PCR驗證 | 收集四尾柵藻藻體，提取基因組DNA，以DGAT1-F和DGAT1-R為引物，進行PCR驗證，未轉(zhuǎn)化的四尾柵藻作對照 |
| 油脂含量測定 | 利用索氏抽提法分別測定③ 等量的轉(zhuǎn)化后和未轉(zhuǎn)化的四尾柵藻 等量的轉(zhuǎn)化后和未轉(zhuǎn)化的四尾柵藻 的油脂含量 |
| 結(jié)果處理 | 統(tǒng)計并比較PCR驗證結(jié)果及藻體中油脂的含量 |
【答案】逆轉(zhuǎn)錄酶、耐高溫的DNA聚合酶；BamHⅠ；XbaⅠ；①②④；稀釋涂布平板法；氨芐青霉素、X-gal、IPTG；卡那霉素；擴大培養(yǎng)；等量的轉(zhuǎn)化后和未轉(zhuǎn)化的四尾柵藻
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/7/13 8:0:9組卷：19引用：1難度：0.6
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴增目的基因時，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6 -
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