野生型甜玉米與普通玉米相比，可溶性糖向淀粉的轉(zhuǎn)化較慢導(dǎo)致可溶性糖含量高，汁多質(zhì)脆，富含多種維生素。為提高甜玉米的生產(chǎn)應(yīng)用價值，科研人員培育出了超量表達(dá)G蛋白轉(zhuǎn)基因甜玉米。在超量表達(dá)G基因載體的構(gòu)建中，所用DNA片段和Ti質(zhì)粒的酶切位點(diǎn)如圖1、2所示。

（1）強(qiáng)啟動子能被

RNA聚合酶

RNA聚合酶

識別并結(jié)合，驅(qū)動基因持續(xù)轉(zhuǎn)錄。T-DNA在培育轉(zhuǎn)基因甜玉米中的作用是

將強(qiáng)啟動子和G基因帶入甜玉米細(xì)胞并整合到甜玉米細(xì)胞染色體的DNA上

將強(qiáng)啟動子和G基因帶入甜玉米細(xì)胞并整合到甜玉米細(xì)胞染色體的DNA上

。為使DNA片段能定向插入T-DNA中，可用PCR技術(shù)在DNA片段的兩端添加限制酶識別序列，M、N端添加的序列所對應(yīng)的限制酶分別是

NotⅠ和SacⅠ

NotⅠ和SacⅠ

。處理好的DNA片段與Ti質(zhì)粒的重組過程共需要

3

3

種酶。
（2）外植體經(jīng)脫分化形成的愈傷組織放入農(nóng)桿菌液浸泡后進(jìn)行植物組織培養(yǎng)，培養(yǎng)基中需加入

潮霉素

潮霉素

進(jìn)行篩選，獲得玉米株系a₁、a₂、a₃、a₄。通過對四個株系的G蛋白表達(dá)量進(jìn)行測定，發(fā)現(xiàn)a₄株系的表達(dá)量與野生型相近，原因可能是

a₄株系玉米中可能沒有導(dǎo)入目的基因或目的基因未表達(dá)

a₄株系玉米中可能沒有導(dǎo)入目的基因或目的基因未表達(dá)

。
（3）真核基因的編碼區(qū)含有內(nèi)含子和外顯子。圖3為淀粉酶合成基因片段，其轉(zhuǎn)錄后形成的前體RNA需通過剪接（切去內(nèi)含子對應(yīng)序列）和加工后方能用于翻譯。科研人員希望通過降低淀粉酶合成基因的表達(dá)，進(jìn)一步提高甜玉米中可溶性糖的含量，將嗎啉反義寡核苷酸（RNA剪接抑制劑）導(dǎo)入玉米受精卵中，發(fā)現(xiàn)其基因表達(dá)受阻?？蒲腥藛T對它的具體作用提出兩種假說。
假說1：導(dǎo)致RNA前體上內(nèi)含子1的對應(yīng)序列不能被剪切；
假說2：導(dǎo)致RNA前體上外顯子2的對應(yīng)序列被剪切。
①為驗(yàn)證上述假說，分別從受精卵發(fā)育后3天的實(shí)驗(yàn)組和對照組胚細(xì)胞中提取

總RNA

總RNA

，逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA。若假說1成立，使用圖示引物2和引物4進(jìn)行PCR后電泳的結(jié)果為

AD

AD

（填字母）。
A.實(shí)驗(yàn)組有目的條帶
B.實(shí)驗(yàn)組無目的條帶
C.對照組有目的條帶
D.對照組無目的條帶
②若要證明假說2，需選擇圖示引物

3和4

3和4

進(jìn)行PCR。