堿性蛋白酶廣泛應用于食品、醫(yī)療等行業(yè)。為了實現(xiàn)低成本高產量的目標，研究人員通過誘變技術獲得高效分泌堿性蛋白酶的地衣芽孢桿菌，再利用基因工程手段將該地衣芽孢桿菌的堿性蛋白酶基因（Apr）導入大腸桿菌，構建了表達胞外堿性蛋白酶的重組菌株。回答下列問題：
（1）在誘變技術處理的過程中，地衣芽孢桿菌發(fā)生了 基因突變基因突變（填“變異類型”）。由于該種變異具有 不定向性不定向性的特點，故誘變后還需經(jīng)過 篩選篩選才有可能獲得高效分泌堿性蛋白酶的芽孢桿菌。
（2）Apr基因兩端的核苷酸序列已知，如圖1所示。利用PCR技術擴增Apr基因所需要的引物是下列中的 ABAB。
A．5′-GGATCTAACGCGATACGC-3′
B．5′-CTCGAGCCGGAAATACTT-3′
C．5′-AAGTATTTCCGGCTCGAG-3′
D．5′-GCGTATCGCGTTAGATCC-3′
（3）PCR擴增產物的電泳結果顯示，除目的基因條帶外，還有2條非特異條帶，可能的原因有：①②①②（填序號），導致引物與模板中的非目的基因片段結合。
①引物序列較短
②引物和模板不完全配對
③復性溫度過高
（4）構建基因表達載體時需要的工具酶有 限制酶、DNA連接酶限制酶、DNA連接酶。如圖是2已構建的重組表達載體pET-28b（+）-Apr示意圖，研究人員用XhoⅠ和NcoⅠ兩種酶（酶切位點見圖2，數(shù)字代表該位點與復制原點的距離）對重組菌株的DNA進行雙酶切，若得到約為 11101110bp和 52315231bp的DNA片段，則初步表明目的基因已成功導入到大腸桿菌細胞內。
【考點】DNA片段的擴增與電泳鑒定．
【答案】基因突變；不定向性；篩選；AB；①②；限制酶、DNA連接酶；1110；5231
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：22引用：1難度：0.5
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1．數(shù)字PCR技術是一種核酸分子絕對定量技術，其原理如圖所示。下列有關敘述正確的是（ ?。?img alt="菁優(yōu)網(wǎng)" src="https://img.jyeoo.net/quiz/images/202204/49/6d911ea3.png" style="vertical-align:middle" />
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：6引用：2難度：0.6 -
2．PCR技術不僅可以擴增目的基因，還可用于定點誘變目的基因等。大引物PCR就是一種定點突變技術。大引物PCR需要用到引物進行兩次PCR，其操作步驟為：
①根據(jù)目的基因序列設計引物，得到兩個常規(guī)引物，分別為常規(guī)上游引物和常規(guī)下游引物；
②根據(jù)突變堿基所處序列位置設計突變上游引物，突變位點位于突變引物序列的中間位置
③由突變上游引物與常規(guī)下游引物進行第一次PCR反應得到下游大引物；
④用得到的下游大引物中和另一個常規(guī)上游引物進行第二次PCR擴增，得到突變目的基因序列?；卮鹣铝袉栴}：
（1）PCR擴增的第一步是使雙鏈模板DNA變性。DNA中G+C的含量與變性要求的溫度有關，DNA中G+C的含量越多，要求的變性溫度越高。其原因是。該PCR擴增技術所需的基本條件是種引物、原料、模板、。
（2）在第一次PCR反應中，形成圖示雙鏈DNA至少要經(jīng)過次復制。第一次PCR的產物DNA的條鏈作為第二次PCR所用的引物。與X射線誘變相比，該突變技術的優(yōu)點是。
（3）如果要利用微生物進一步克隆PCR定點誘變產物，其步驟包括：、、微生物的篩選和培養(yǎng)、從菌群中獲取更多目的基因。將獲取目的基因和質粒進行連接后，需先用處理農桿菌以便將基因表達載體導入馬鈴薯細胞，將馬鈴薯細胞培養(yǎng)成幼苗時經(jīng)過的兩個過程是。檢測目的基因是否在馬鈴薯細胞中轉錄出了mRNA，所采用的方法是。發(fā)布：2024/12/30 23:0:2組卷：32引用：3難度：0.6 -
3．下列關于DNA片段擴增及其鑒定的說法錯誤的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：3引用：3難度：0.7
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