類黃酮是花粉發(fā)育過(guò)程中的重要物質(zhì)，苯基苯乙烯酮合成酶（CAS）是其生物合成的關(guān)鍵酶?？蒲腥藛T將CAS基因和CaMV35S啟動(dòng)子融合組成反義CAS基因（反義基因是通過(guò)原基因反向連接而成的，其轉(zhuǎn)錄出的RNA能與原基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA互補(bǔ)配對(duì)），并在矮牽?；ㄖ斜磉_(dá)，阻止了花粉的正常發(fā)育，得到雄性不育的矮牽牛植株。構(gòu)建的反義CAS基因的結(jié)構(gòu)如圖所示?；卮鹣铝袉?wèn)題：

（1）實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增CAS基因的前提，是要有

一段已知目的基因的核苷酸序列

一段已知目的基因的核苷酸序列

，以便合成引物。圖示反義CAS基因不能被各種限制酶切割，還要在引物一端添加

限制酶識(shí)別序列

限制酶識(shí)別序列

。
（2）可用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將重組質(zhì)粒導(dǎo)入矮牽牛植株，構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，要將反義CAS基因插入Ti質(zhì)粒的

T-DNA（或可轉(zhuǎn)移DNA）

T-DNA（或可轉(zhuǎn)移DNA）

上。然后對(duì)導(dǎo)入了反義基因的細(xì)胞篩選后培養(yǎng)，組織培養(yǎng)過(guò)程中，從脫分化到再分化的過(guò)程中需要更換新的培養(yǎng)基，其原因是

脫分化階段所需要的生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的比例和再分化階段是不同的

脫分化階段所需要的生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的比例和再分化階段是不同的

。細(xì)胞能發(fā)育為完整矮牽?；?，根本原因是

矮牽?；?xì)胞具有全能性（或矮牽牛花細(xì)胞含有發(fā)育所需要的全套遺傳物質(zhì)）

矮牽?；?xì)胞具有全能性（或矮牽?；?xì)胞含有發(fā)育所需要的全套遺傳物質(zhì)）

。
（3）實(shí)驗(yàn)小組欲在個(gè)體水平上檢測(cè)轉(zhuǎn)基因雄性不育植株是否培育成功，若檢測(cè)結(jié)果為

矮牽?；▎为?dú)培養(yǎng)時(shí)不結(jié)實(shí)，人工授粉后能結(jié)實(shí)

矮牽牛花單獨(dú)培養(yǎng)時(shí)不結(jié)實(shí)，人工授粉后能結(jié)實(shí)

，則說(shuō)明轉(zhuǎn)基因植株培育成功。