大腸桿菌pUC118質(zhì)粒的某限制酶唯一酶切序列,位于該質(zhì)粒的lacZ基因中,lacZ基因中如果沒(méi)有插入外源基因,lacZ基因便可表達(dá)出β-半乳糖苷酶,當(dāng)培養(yǎng)基中含有IPTG和X-gal時(shí),X-gal便會(huì)被β-半乳糖苷酶水解成藍(lán)色,大腸桿菌將形成藍(lán)色菌落;如果lacZ基因中插入了外源基因,帶有pUC118質(zhì)粒的大腸桿菌便不能表達(dá)β-半乳糖苷酶,培養(yǎng)基中的X-gal不會(huì)被水解成藍(lán)色,大腸桿菌將形成白色菌落.pUC118還攜帶了氨芐青霉素抗性基因.左圖是利用lacZ基因的插入失活篩選重組質(zhì)粒示意圖.據(jù)圖回答下列問(wèn)題:
(1)人體DNA的目的基因中不能不能(能或不能)含有大腸桿菌pUC118質(zhì)粒的某限制酶唯一酶切序列.
(2)作為受體大腸桿菌應(yīng)不含氨芐青霉素抗性基因(或?qū)Π逼S青霉素敏感)不含氨芐青霉素抗性基因(或?qū)Π逼S青霉素敏感),以方便篩選已導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體大腸桿菌.為了增加導(dǎo)入成功率,取用Ca2+Ca2+溶液處理(可增加細(xì)菌細(xì)胞壁細(xì)胞壁的通透性)過(guò)的受體大腸桿菌,置于試管Ⅱ中,并加入在試管Ⅰ中制備好的DNA在試管Ⅰ中制備好的DNA.
(3)圖中的選擇培養(yǎng)基中除含有大腸桿菌必需的葡萄糖、氮源、無(wú)機(jī)鹽、水、生長(zhǎng)因子等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外,還應(yīng)加入IPTG、X-gal、氨芐青霉素IPTG、X-gal、氨芐青霉素等物質(zhì),用以篩選導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的受體大腸桿菌.
(4)將上述處理后的大腸桿菌置于圖中選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng),以檢測(cè)受體大腸桿菌是否導(dǎo)入重組質(zhì)粒,請(qǐng)預(yù)測(cè)菌落的顏色,并分析結(jié)果:
①如果長(zhǎng)出藍(lán)色菌落,說(shuō)明自連的運(yùn)載體pUC118質(zhì)粒已轉(zhuǎn)入受體菌,但目的基因沒(méi)有接入運(yùn)載體(或說(shuō)明重組質(zhì)粒沒(méi)導(dǎo)入受體大腸桿菌)如果長(zhǎng)出藍(lán)色菌落,說(shuō)明自連的運(yùn)載體pUC118質(zhì)粒已轉(zhuǎn)入受體菌,但目的基因沒(méi)有接入運(yùn)載體(或說(shuō)明重組質(zhì)粒沒(méi)導(dǎo)入受體大腸桿菌)
②如果長(zhǎng)出白色菌落,說(shuō)明重組質(zhì)粒已導(dǎo)入受體大腸桿菌如果長(zhǎng)出白色菌落,說(shuō)明重組質(zhì)粒已導(dǎo)入受體大腸桿菌.
【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合.
【答案】不能;不含氨芐青霉素抗性基因(或?qū)Π逼S青霉素敏感);Ca2+;細(xì)胞壁;在試管Ⅰ中制備好的DNA;IPTG、X-gal、氨芐青霉素;如果長(zhǎng)出藍(lán)色菌落,說(shuō)明自連的運(yùn)載體pUC118質(zhì)粒已轉(zhuǎn)入受體菌,但目的基因沒(méi)有接入運(yùn)載體(或說(shuō)明重組質(zhì)粒沒(méi)導(dǎo)入受體大腸桿菌);如果長(zhǎng)出白色菌落,說(shuō)明重組質(zhì)粒已導(dǎo)入受體大腸桿菌
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布:2024/4/20 14:35:0組卷:9引用:1難度:0.5
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